虎杖提取物白藜芦醇的抗白血病作用及其可能的分子机制

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1、虎杖提取物白藜芦醇的抗白血病作用及其可能的分子机制【关键词】白藜芦醇细胞凋亡白血病　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheantileukemiaeffectsofresveratrolonthreeleukemiacelllinesHuT78,JurkatandL1210invivo.MethodsMTTcolorimetryeasurethetumorcellgroeasuredbyTT购自Sigma公司；RPMI1640、胎牛血清(FCS)购自Gibco公司；抗人(鼠)Bcl2抗体购自Labvision公司；抗鼠(人)pSTAT3多克隆抗体购自Santa

2、Cruz公司；AnnexinVFITC试剂盒购自晶美生物工程有限公司；小鼠淋巴细胞白血病细胞株(L1210)由西安交通大学生命科学与技术学院王一理老师惠赠；人皮肤T细胞淋巴瘤(HuT78)、人T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat,CloneE61)由西安交通大学医学院第一附属医院陈颖老师惠赠。　　1.2形态学观察37℃、5%(体积分数)CO2培养箱，含10%(体积分数)胎牛血清的完全1640细胞培养基培养细胞。传代时，800r/min离心5min，收集细胞悬液。按1∶3或1∶4分入新的培养瓶中，再加入适量1640完全培养基。锥虫蓝染色法活细胞计数>95%后，于NikonTMSF

3、倒置显微镜下观察各白血病细胞在白藜芦醇作用前后的形态、结构及数量的变化。　　1.3苏木素伊红(HE)染色0.78、1.56、3.13、6.25、12.50、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理细胞12、24、48h后，涂片，HE染色观察白血病细胞的凋亡情况。　　1.4MTT比色法进行细胞增殖分析将细胞以完全RPMI1640培养基配成5000个/mL细胞悬液，按照文献[3]方法进行白血病细胞增殖分析，同时设小鼠成纤维细胞3T3作正常细胞对照。　　1.5流式细胞术分析细胞周期各组细胞培养24h，换含0.5%(体积分数)血清的RPMI1640培养基同步化12h[4]，调细胞浓度为1×105

4、个/mL细胞悬液。实验组加3mL含白藜芦醇的培养基，对照组加等体积培养基，5%(体积分数)CO2，37℃，培养6h。PI染色后在FACSCalibur型流式细胞仪上测定。　　1.6磷脂酰丝氨酸外翻分析调细胞浓度为1×105个/mL细胞悬液。实验组加含白藜芦醇的培养基，对照组加等体积培养基，5%(体积分数)CO2，37℃，分别培养12、24、48h。FITC标记的AnnexinV和PI染色后立即用激光共聚焦显微镜和FACScan流式细胞仪检测。　　1.7orphologicalchangesofcellstreatedol/Lresveratrolfor24h(×400)　　A:HuT78

5、cells;B:Jurkatcells;C:L1210cells　　图2100μmol/L白藜芦醇处理24h后各组白血病细胞的凋亡情况（略）　　Fig.2Theapoptosisoftumorcellstreatedol/Lresveratrolfor24h(HE×400)　　A:HuT78cells;B:Jurkatcells;C:L1210cells　　图3MTT法分析白藜芦醇对白血病细胞的生长抑制作用（略）　　Fig.3InhibitionofgroinedbyMTTassay　　A:HuT78cells;B:Jurkatcells;C:L1210cells;D:mousefibr

6、oblast3T3cells　　2.4白血病细胞周期的分布流式细胞分析显示，白藜芦醇处理组较对照组G0/G1期细胞由34.93%减至30.12%，S期细胞由41.14%上升至49.17%(HuT78)；Jurkat细胞各周期未见显著变化；L1210细胞主要为S期改变：由59.02%上升至65.57%，细胞被明显阻滞在S期(图4)。　　A,C,E:controlcellsincubatedol/Lresveratrol,respectively　　2.5白藜芦醇对白血病细胞凋亡的影响激光共聚焦显微镜观察到50mol/L处理12h后，约25%L1210细胞发生早期凋亡，培养48h后，几乎所有的

7、细胞都发生了凋亡或坏死(图5)。流式细胞术分析可见(图6)，100mol/L白藜芦醇作用12h，大多数HuT78细胞都发生了细胞凋亡(84.33%)；Jurkat细胞和L1210细胞的凋亡率分别为41.99%和50.94%。因此，同样条件下，白藜芦醇对HuT78细胞与L1210细胞的促凋亡作用强于对Jurkat细胞。　　2.6Bcl2蛋白的表达水平本研究通过蛋白印迹法分析了不同浓度白藜芦醇对3种白血病细