利凡诺对不同胚层来源细胞增殖能力的影响

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1、利凡诺对不同胚层来源细胞增殖能力的影响【摘要】目的:观察利凡诺对于不同胚层的细胞生长和增殖能力的影响。方法:运用形态学观察法观察细胞在经不同浓度利凡诺(3.13、6.25、12.5μg·ml-1)作用不同时间(24、48、72h)后形态学的改变，同时在荧光显微镜下观察细胞中利凡诺的荧光强度。用噻唑蓝(MTT)法以及核仁组织区银染法(AgNOR)检测利凡诺作用后各细胞增殖能力的改变。结果：利凡诺作用24h后，肝细胞(BRL3A)及成纤维细胞(L929)的形态无明显变化，人脐静脉内皮细胞(HuVEC)突起变细甚至消失，细胞生长速度变慢;伴随药物浓度的增大，单位面积细胞数逐渐减少

2、;3种细胞内利凡诺自发荧光随着药物浓度增大和时间延长而增强。MTT结果显示利凡诺对3种细胞的增殖都有一定的抑制作用，其中对HuVEC细胞增值能力的抑制强于另外两种细胞(均P<0.01)。在不同浓度利凡诺作用下，HuVEC核仁组织区减少幅度较另外两种细胞更加明显，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:利凡诺对不同胚层的3种细胞的增殖能力均有抑制作用，其中对HuVEC的抑制尤其显著，提示该药对内皮细胞生长增殖的抑制较为特异。【关键词】利凡诺;人脐静脉内皮细胞;肝细胞;成纤维细胞　　[Abstract]Objective:Toobservethei

3、nfluenceofrivanolongrodifferentgermlayers.Methods:Aftertreatedbydifferentrivanolconcentration(3.13,6.25,12.5μg·ml-1)anddifferente(24、48、72h),morphologicalchangesofcellsandrivanolautofluorescenceintensityincellsicroscope.TT)methodandsilverstainingnucleolarorganizerregion(AgNOR)method,thechan

4、geofcellproliferationabilityorphologicalchanges,anumbilicalveinendothelialcells(HuVEC)protrudingthinnerorevendisappear,cellgrobersperunitareagraduallyreduced.Rivanolautofluorescencestrengthinthreekindsofcellsedependentincreased.MTTresultsshoorepronouncedthantheothertdifferentsourcesofthethr

5、eegermlayersongthethreekindsofcellstheinhibitiontoHuVECcellsisparticularlynotable,suggestingthattherivanolontheinhibitionofendothelialcellgrooresensitive.　　[Keyanumbilicalveinedothelialcell;livercell;fibroblast　　利凡诺(rivanol)由于在终止中期妊娠方面具有良好作用，自1922年被发现以来即受到了广泛关注和研究[1-6]，而对利凡诺在其他领域的作用研究较少。20世

6、纪90年代，本研究组首先报道了利凡诺的抗肿瘤作用[7-9]，此后又发现利凡诺对人脐静脉内皮细胞(HuVEC)也具有较强的抑制作用[9]，所以我们推测利凡诺对血管内皮细胞的抑制是其抗肿瘤机制之一，亦即利凡诺可能是一种潜在的血管生成抑制剂。但是目前许多血管生成抑制剂对机体的正常细胞也有较强的毒副作用，不利于长期用药，从而使其抗肿瘤作用的发挥受到很大限制。显然有必要了解利凡诺抗肿瘤作用是泛细胞毒效应，还是对某类细胞有特异的抑制作用。基于此，本实验选择于内胚层的正常肝细胞(BRL3A)，于中胚层的HuVEC和成纤维细胞(L929)作为实验基础材料，观察不同浓度利凡诺对不同胚层细胞的

7、增殖能力的影响是否存在差异性，进一步探讨利凡诺抑制细胞生长的机制及其临床应用的可能性。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1细胞培养及处理HuVEC、L929细胞株系本实验室张东生教授惠赠(购自中国科学院上海细胞生物研究所),将其接种于含10%小牛血清和100U·ml-1青霉素、100mg·ml-1链霉素的RPMI1640培养液中,置于37℃、体积分数为0.05的CO2恒温培养箱中培养,每隔2～3d传代1次。BRL3A细胞株系本实验组留存(购自中国科学院上海细胞生物研究所)，接种于含10%小牛血