白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的论文

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1、白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的论文摘要】目的：探讨白藜芦醇(res)对实验性重症急性胰腺炎(sap)大鼠肺损伤的保护作用及其机制.方法：32只成年雄性sd大鼠随机分为假手术(so)组；sap组；地塞米松(dex)组和res治疗组.各组大鼠在制模后12h采集标本.动脉血气分析检测动脉血氧分压（pao2）；酶联免疫吸附试验(elisa)测定血清tnfα和il6含量；透射电镜(tem)观察肺脏超微结构变化；rtpcr检测凋亡调控基因bax,bcl2和caspase3mrna表

2、达；mhg，res组和dex组pao2水平明显高于sap组（p<0.05）.tnfα含量分别为：（12.54±0.75），（95.59±5.61），（61.66±3.33），（50.90±4.62）ng/l，res组与sap组相比较，差异有统计学意义（p<0.05）.il6含量分别为：（9.29±1.75），（55.68±7.24），（32.29±3.98），（42.51±3.3）ng/l，res组与sap组相比较，il6含量明显降低（p<0.05）.he和tem镜下观察结果显

3、示，sap组肺组织明显充血肿胀，并可见大量炎细胞浸润和细胞凋亡，线粒体肿胀明显；res组肺组织病理损害程度较sap组减轻；pcr结果显示，sap组凋亡调控基因bax,caspase3mrna表达较so组明显升高，bcl2mrna表达降低，res组bcl2mrna表达较sap组升高(p<0.05)，bax,caspase3mrna表达较so组明显降低，a公司）；res（西安奥塞斯生物有限公司）；tnfα，il6elisa检测试剂盒（深圳晶美生物工程有限公司）；pcr试剂盒（大连宝生物工

4、程有限公司）；引物由上海生物工程技术服务有限公司合成；凋亡调控蛋白bax，bcl2，caspase3，细胞色素c（cytochromec,cytc）mab（美国santacruz生物技术有限公司）；辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠ⅱ抗、小鼠抗βactinmab（北京博奥森生物技术有限公司）；线粒体提取试剂盒（上海杰美生基因医药科技有限公司）；增强化学发光剂(美国pierce生物技术有限公司)；透射电镜（日本东芝公司）.1.2方法1.2.1动物分组及sap模型建立将32只大鼠随机分为假手术（so）组、

5、sap组、res治疗组和地塞米松（dexamethasone,dex）组，每组动物8只.大鼠禁食12h，禁水4h，25g/l戊巴比妥钠（1.2mg/kg）腹腔注射麻醉.动脉夹夹闭胰胆管近端和远端，40g/l牛磺胆酸钠（1ml/kg）经胰胆管逆行注射建立sap模型，注射时间保持1min，拔出穿刺针，取出动脉夹.so组仅于开腹翻动十二指肠后缝合腹壁，胰胆管内不注射任何药物；在建立sap模型后，经阴茎背静脉res组立即注射res10mg/kg；dex组立即注射dex0.5mg/kg.大鼠在制模后12h剖杀取

6、材.1.2.2大鼠腹水计量和死亡率记录在取材前先打开大鼠腹壁，以10ml无菌注射器收集大鼠腹水并计量.大鼠死亡率计算方法为未到12h死亡的大鼠从本组中排除，另选大鼠补齐，以死亡的大鼠数量和总计应用的大鼠数量比值计算大鼠死亡率.1.2.3动脉血pao2检测在大鼠剖杀前从腹主动脉取血0.5ml,应用istat全自动血气分析仪检测各组大鼠动脉血气分析.1.2.4血浆tnfα和il6elisa检测应用elisa检测试剂盒检测大鼠血浆中tnfα和il6含量，详细步骤严格按照试剂盒说明书进行操作.1.2

7、.5肺组织和胰腺组织的病理学观察肺组织和胰腺组织40g/l多聚甲醛固定后，常规石蜡包埋切片，he染色，光镜下观察胰腺组织病理学改变.另取肺脏和胰腺组织1mm×1mm×1mm以25g/l戊二醛4℃固定8h，梯度乙醇脱水，环氧树脂epon812浸透，lkbv型超薄切片机进行超薄切片（50~70nm），电镜下观察肺和胰腺组织超微结构改变.1.2.6肺组织总rna提取及rtpcr用trizol试剂提取肺组织中的总rna，测定260nm/280nm的a值，计算rna浓度.取rna2μl，用rt试剂盒合成cd

8、na链.再以逆转录反应液2μl作为模板，pcr试剂盒进行扩增.pcr反应条件为：变性94℃30s，退火55℃45s,延伸72℃1min，共30个循环；72℃延伸10min终止反应.扩增产物用15g/l琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶成像系统摄影.检测指标为凋亡调控基因bax，bcl2和caspase3，以βactin作为内参照.bax引物序列为：上游5′tccaggatcgagcaga3′，下游5′aagtagaagagggcaacc3′(256b