姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖的影响

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1、姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖的影响复旦大学附属中山医院麻醉科邮编200032张鹏黄海琼姜桢【摘要】目的：研究姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：实验分对照组和不同浓度姜黄素处理组。药物作用24小时后，MTT法测姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪检测姜黄素作用后细胞周期变化。结果：姜黄素以浓度依赖的方式抑制肺微血管平滑肌细胞增殖；流式细胞仪分析显示，姜黄素处理过的细胞S期明显减少，主要停滞在G0/G1期。结论：姜黄素可以抑制大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖，呈现浓度依赖性，其作用可能是通过阻滞细胞周期进程实现的。

2、关键词：姜黄素；肺小血管平滑肌细胞；细胞周期Effectofcurcuminonproliferationofratpulmonarymicrovascularsmoothmusclecells【Abstract】Aim:Toexploretheeffectofcurcuminonproliferationofratpulmonarymicrovascularsmoothmusclecells.Methods:Theinhibitoryrateofratpulmonarymicrovascularsmoothcellsindifferentco

3、ncentrationsofcurcuminweremeasuredbyMTTassay.Cellcyclewasdetectedbyflowcytometry.Result:Theinhibitoryeffectofcurcuminonratpulmonarymicrovascularsmoothcellswasshowedinadose-dependentmanner(P﹤0.05).CellcycleanalysisshowedreducedpercentageofcellsinSphaseandG0/G1phasearrest(P﹤0.

4、05).Conclusion:Curcuminexertsinhibitoryeffectonproliferationofratpulmonarymicrovascularsmoothmusclecellsinadose-dependentmannerpossiblythroughinduingcellcyclearrest.Keywords:curcumin;pulmonarymicrovascularsmoothmusclecells;cellcycle肺动脉高压发病中病理学改变主要在肺小动脉1，肺小血管出现明显的重构，内膜、中膜及外膜的

5、内皮细胞，平滑肌细胞和成纤维细胞异常增殖，各层细胞间基质沉积2。如何抑制肺血管细胞的异常增殖，降低肺动脉压力成为治疗肺动脉高压的一项重要措施。姜黄素，中药姜黄中提取的一种酚性色素，常作为调味品及染料。近年来的研究显示在心血管系统中具有明显的保护作用，抑制主动脉平滑肌细胞的增殖3。本实验研究姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞增殖的影响。1材料和方法1.1动物、试剂及器材：健康清洁级成年SD大鼠，体重180～200g，购自复旦大学动物实验中心。胎牛血清购自Gibco公司，Ⅳ型胶原酶购自Sigma公司,姜黄素购自南京泽朗医药科技有限公司，纯度大于98%。

6、1.2方法1.2.1肺小血管平滑肌细胞的分离培养：SD大鼠经腹腔注射10%水合氯醛（0.35-0.4ml/kg）麻醉后固定于动物解剖台上，剃去头颈及胸腹部毛发后，用碘伏及酒精棉球仔细消毒大鼠头颈及胸腹部，放入超净台内，在手术区域周围铺好无菌纱布。沿胸骨正中打开并暴露胸腔，剪开心包，静脉留置针（18号）经右心室穿刺进入肺动脉并固定，左心房开口，经肺动脉灌注37°C含100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的PBS液约15～20ml/30s～1min至冲洗液为淡血水样或清亮，再灌注37°C0.05%胰蛋白酶液10ml/30s，夹闭肺动脉及左心房约

7、8～10min；用37°C含100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的PBS液约10ml冲洗后，灌注37°C含0.5%三氧化二铁和0.5%低融点琼脂糖的培液1（含100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM液）15ml/kg/30s，并立即夹闭肺动脉及左心房；经气管插管灌注50°C1%低融点的琼脂糖40ml/kg后夹闭气管，迅速摘取大鼠心肺组织放入预先置于冰上的培液1中5-8min至组织中的琼脂糖凝固，沿胸膜下1mm处剪下肺组织放入另一37°C培液1中，在解剖显微镜下观察肺细小动脉，将含直径>200μm肺动脉的肺叶剪除，再将剩余肺组织

8、剪成2～3×1mm大小的碎小组织块，取1～2块碎组织块多聚甲醛固定行石蜡切片后，将剩余组织放入0.2-0.3%Ⅳ型胶原酶中37°C孵育45min-60