β反义寡核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

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1、β反义寡核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响摘要:目的研究血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）反义寡核苷酸（AODN）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响.方法建立大鼠血管平滑肌细胞体外增殖模型.将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组，其中反义组按浓度又分为1，2.5，5，10和15μmolL-15小组.在加药后24，48和72h以流式细胞仪测定细胞周期，免疫细胞化学染色分析细胞核增殖抗原的表达，MTT（四唑盐）比色法测定细胞增殖活力.结果10μmolL-1PDGFR

2、-βAODN干预VSMC48h后，处于DNA合成前期（G0/G1）细胞数分数（0.70）高于空白对照组（0.07，P<0.05）;PA免疫细胞化学染色发现以5～15μmolL-1PDGFR-βAODN干预48h后VSMC各组胞核染色强度为20.4%～6.4%明显弱于空白组（73.8%），正义组（72.9%）和无义组（75.6%）（P<0.05）;10μmolL-1PDGFR-βAODN作用48h后VSMC的增殖抑制率为66.7%，高于正义组（8.1%），错义组（11.8%）和5μmolL-1A

3、ODN组（45.4%）（P<0.05）;同时10μmolL-1AODN组48h增殖抑制率与24h（9.1%）相比明显增加（P<0.05）.结论PDGFR-βAODN对VSMC增殖有明显抑制作用，并且呈时间和浓度依赖性.Keyoothmusclecell;restenosis;plateletderivedgrooothmusclecells（VSMC）.METHODSCulturedrataorticVSMCmod-elbledoligonucleotide（CODN）groupandcont

4、rolgroup.ThecellsinAODNgroupallgroupsbyconcentrationof1，2.5，5，10，15μmolL-1.MTTassay，floetry，immunohis-tochemistryforproliferatingcellnuclearantigene（PA）inetheeffectsofPDGFR-βAODNonproliferationofVSMC.RESULTSThepercentageofquies-centcells（G0/G1）ofAODNgroup

5、at48h（0.70）uchhigherthanthatofcontrolgroup（0.07），P<0.05.Theper-centagesofexpressionofPAolL-1AODNolL-1AODNgroupat48h（64.7%）olL-1AODNgroup（45.4%），and10μmolL-1AODNgroupat24h（9.1）（P<0.05）.CONCLUSIONPDGFR-βAODNcouldinhibitproliferationofculturedVSMCinado

6、seandtime-dependentpattern.　　0引言　　经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）和冠状动脉旁路移植术（CABG）是治疗冠心病的有效手段，但30%～50%术后再狭窄严重影响手术疗效［1，2］.研究证明再狭窄的实质就是血管中层平滑肌细胞向内膜下迁移和增生［3］.血小板衍化生长因子及其β受体（PDGFR-β）在血管平滑肌细胞（VSMC）的迁移增生过程中起重要作用［4］.我们拟探讨在大鼠体外VSMC增殖模型中，PDGFR-β反义寡核苷酸（AODN）对VSMC增殖的影响.　　1材料和方法　　1

7、.1材料SD大鼠清洁级，4Ab、混合胶原酶、胰蛋白酶、MTT购于Sigma公司;96孔培养板、6孔培养板购于Costar公司;PDGFR-βAODN链（18bp）5’TATCACTCCTGGAAGCCC3’，正义寡核苷酸链（SODN）5’GGGCTTCCAGGAGTGATA3’，无关寡核苷酸链（CODN）5’GTGATAGTATGCCGAGCA3’，由加拿大上海Sagon公司合成并进行全硫代磷酸化修饰和电泳鉴定;SABC试剂盒购于武汉博士德生物工程公司;胎牛血清购于浙江金华犊牛研究所;流式细胞仪（EFIC

8、SELITE法国）;酶联免疫检测仪（DG5031，华东电子仪器厂）;SD大鼠颈椎脱臼法处死后，采用胶原酶法分离取得VSMC进行原代培养和传代培养，经α-SMactin免疫细胞化学染色鉴定确为VSMC、纯度>95%，采用5～10代细胞为实验对象.　　1.2方法　　1.2.1VSMC细胞增殖活力的测定取生长融合期细胞制成1×104L-1密度的单细胞悬液接种于96孔板，待细胞完全贴壁伸展后，无血清DMEM培养液驯化24h.采取