表达水泡性口炎病毒g蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性分析

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1、密级：论文编号：中国农业科学院学位论文表达水泡性口炎病毒G蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性分析StudyontheConstructionandImmunogenictiyofRecombinantAdenovirusExpressingGProteinofVesicularStomatitisVirus硕士研宄生：薛晓娟指导教师：李刚教授申请学位类别：农学硕士专业：葡贈医学研宄方向：与培养单位：北京畜牧兽医研究所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

2、包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：辱时间：城年上月巧日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名:时间：>/j：年i:月7日导师签名:时间:年$•月以

3、曰中

4、国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目表达水泡性口炎病毒G蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性分析动物重大疫病论文作者薛晓娟专业预防兽医学研宄方向的诊断与防控指导教师李刚培养单位（研究所）北京畜牧兽医研宄所姓名职称硕（博）单位专业签名评硕导口孙怀昌教授扬州大学预防兽医学博导口阅副研宄硕导口蒋桃珍中国兽医药品监察所预防兽医学人员博导口答辩主席硕导口毛开荣研宂员中国兽医药品监察所预防兽医学博导口硕导口毛开荣研宂员中国兽医药品监察所预防兽医学博导口硕导口中国农业科学院北京畜崔尚金研究员预防兽医学博导口牧兽医研究所答硕导口中国农业科学院北京畜朱鸿飞研究员博导口牧兽

5、医研究所辩硕导口郑瑞峰研究员北京市畜牧总站博导口委硕导口何宏轩研究员中国科学院动物研究所.口博导口贝会议记录（秘书）袁维峰论文答辩时间地点2015年5月25日北京畜牧兽医研宂所科辅楼202会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationStudyonConstructionandImmunogenictiyofRecombinantAdenovirusExpressingGProteinofVesicularStomatitisVirusM.S.Candidate：XueXiaojuanSup

6、ervisor：Prof.LiGangMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:Diagnosis,PreventionandControlofMajorAnimalInfectiousDiseasesMay2015摘要水泡性口炎(Vesicularstomatitis，VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicularstomatitisvirus，VSV))引起的高度接触性人畜共患的重大传染性疫病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定通报传染病，也是《中华人民共和国进出境动植物检疫法》规定的进境动物二类传染病。目前，该病还

7、没有有效的治疗方法，只能通过疫苗进行防控。在疫苗研究方面，国内外已有一些研究，但新型疫苗的研究有待进一步开发。VSV糖蛋白(G)定位在包膜的突起上，刺激机体产生中和抗体,呈现型乃至株的特异性，是研究VSV基因工程疫苗的首选抗原。本研究利用人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体，构建了表达VSV单一血清型的G蛋白及两血清型G蛋白融合蛋白的重组腺病毒，并对其免疫原性进行了初步分析。本研究设计了三对分别扩增VSV-IN-G、VSV-NJ-G及VSV-IN-G-NJ-G基因的特异性引物，利用PCR技术扩增VSV-IN-G基因及VSV-NJ-G基因；通过GlyGlyGlyGlySer

8、多肽序列的连接，利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因。将三个目的基因分别克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMVK-NpA中，构建含有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒。利用PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定筛选阳性重组质粒。将鉴定正确的重组穿梭质粒分别用PacI酶线性化后，与同样用PacI酶线性化的骨架载体pacAd59.2-100共转染AAV-293细胞，成功包装出了三株重组腺病毒rAd-VSV-NJ-G,rAd-VSV-IN-G及rAd-VSV-IN-G-NJ-G。将三种重组腺病毒分别接种于AAV-293细胞，连续传代至20代，测定其TC