同种移植激活的宿主树突状细胞能介导免疫耐受论文

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1、同种移植激活的宿主树突状细胞能介导免疫耐受论文.freelicselectioniscriticalforthematurationofbonemarroicmedullaandisnormallymediatedbybonemarroacrophages.Immunodominantallopeptide-pulsedhostdendriticcellscansuccessfullyinducetransplantationtolerance.MethodsHostdendriticcellsarroarroarromunosuppression，trans

2、fusionofdonorantigensactivateddendriticcellscanprolongskinallograftsurvivalmarkedly.【Keyent；dendriticcells；transplantation；tolerance；thymus器官移植在人造组织、器官成功应用之前仍然是挽救某些不可逆病变的最优的治疗手段。而造成移植手段失败的主要原因是由于移植后的排斥反应造成［1］。发展更为精细的组织配型以及大量新的免疫抑制药物的开发与应用是目前国内外对付排斥反应的手段。但是，移植供体的局限性必将导致HLA配型的局限性；而免疫抑

3、制剂的毒性和副作用又限制了其长期和大量的应用［2，3］。因此，如何克服免疫排斥反应目前仍然是国内外外科学家和医生急于探讨和急需解决的课题。诱导移植受体对供体器官产生特异性免疫耐受可以避免长期应用免疫抑制药物所引起的非特异性免疫抑制及其他毒副作用，被认为是防止器官移植排斥的理想方法［4～6］。Ｔ细胞，是介导细胞和体液免疫反应的核心细胞，也是排斥反应中的核心细胞。如果能使Ｔ细胞对于移植供体产生免疫耐受，将成为解决排斥反应的有效方法。但是，由于外周ＴＣＲ库的丰富内涵，以及供体组织器官的抗原多样性，使得诱发外周Ｔ细胞对于移植产生耐受的方案具有相当的难度，至今在国内外的

4、解决办法也就是应用一些T细胞的抑制剂。为此，我们设计新的技术路线，要寻求出一种方法，既能诱导出T细胞对供体组织器官的耐受，而又能保持T细胞的正常免疫功能，以期待得到解决此问题的理想方案。众所周知，外周不同的Ｔ细胞和TCR都是源于相同的骨髓来源的前T细胞，其多样性是在胸腺发育过程中通过TCR基因重排而产生的，而其自身免疫耐受主要是产生于T细胞在胸腺发育过程中的阴性选择，通过阴性选择，克隆清除自身反应性T淋巴细胞，这是中枢耐受的主要机制之一［7，8］；最新的研究还发现，非删除性的耐受在中枢耐受中也有着极其重要的作用，主要包括CD4+、CD8+调节性T细胞Treg的

5、作用［5，6］；S.F.Olua-Aldrich，Inc公司。Dynabeads○R小鼠panT(Thy1.2)磁珠标记的抗体购自Dynal，Inc.公司。PE标记抗小鼠CD4抗体，FITC标记抗小鼠CD8抗体由北京大学医学部免疫学系提供。DMEM和PBS由北京大学人民医院提供。1.3激活并分选宿主树突状细胞为激活宿主树突状细胞（DCs），在分选细胞前的第１０天，给BALB/c宿主动物行同种异体皮肤移植，皮片供者为C57BL/6鼠。然后于收获细胞的当天处死这些BALB/c宿主动物，取它们的脾脏，通过HISTOPAQUE○R-1083小鼠淋巴细胞分层液离心分层收

6、获单核细胞，再使用Dynabeads○R小鼠panT(Thy1.2)磁珠抗体通过阴性分选去除小鼠Thy1.2阳性的细胞，最终得到含激活DCs的小鼠脾细胞，用DMEM调整细胞浓度到3.0×107cells/ml。1.4宿主骨髓细胞分选用１ｍｌ注射器使用DMEM冲洗BALB/c宿主动物的股骨和胫骨骨髓腔，收集细胞，离心洗涤一遍，然后用DMEM调整细胞浓度到5.0×106cells/ml。1.5受者动物的准备在接受皮肤移植前的第３０天，BALB/c受者首先接受900rad致死量的伽玛射线照射，射线源为北京大学医学部钴-60照射室，然后于照射后的６h内，每只BALB/

7、c受者，通过尾静脉，或者输入1.0×106骨髓细胞，或者输入1.0×106骨髓细胞和5.0×106激活的宿主DCs细胞的混合细胞。1.6移植和耐受诱导在回输细胞后的第３０天，不同处理的BALB/c受者给予同种异体皮片移植，取自小鼠尾巴的皮肤剪裁成大小为0.9cm×0.9cm的皮片［11］，如表１所示，接受来自C57BL/6鼠的皮片的动物作为耐受诱导组１，接受来自129鼠的皮片的动物作为特异性对照组３。1.7病理组织学分析于空白对照组排斥的时间，即皮片移植后第１１天取材，取材部位是移植皮片及其周边０．５ｃｍ范围内的皮肤组织，在北京大学干细胞中心处做石蜡切片，HE

8、染色，光镜分析。1.8流式细胞分析分别