乌司他丁（天普洛安）对大鼠放射性肺损伤过程中tg

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1、乌司他丁（天普洛安）对大鼠放射性肺损伤过程中TG【摘要】目的：探讨乌司他丁（天普洛安）对大鼠放射性肺损伤过程中TGFβ1水平的影响，探讨其在治疗放射性肺损伤中的作用.方法：60只雌性SD大鼠随机分为3组：对照组（C组）、单纯照射组（R组）、乌司他丁治疗组（U组）.R及U组大鼠行直线加速器全胸部照射一次，剂量为20Gy.照射后U组通过尾静脉注射乌司他丁［10000U/（kg·d）］，共计7d；C，R组注射同等体积的生理盐水.于照射后7，15，30，60d处死动物，取部分组织行HE染色及Masson染色观察组织学及肺胶原蛋白等，另取部分组织行免疫组化染色观察TGFβ1阳性

2、细胞；使用酶联免疫吸附分析法检测肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平.结果：R，U组在照射后肺间质密度、TGFβ1阳性面积以及肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平随时间增加而逐渐升高，其中以R组30，60d时与C组比较最为明显(P<0.01)，同时可以发现U组与同期R组相比较具有统计学意义(P<0.01)；肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平变化与肺组织病理学变化趋势基本一致.结论：TGFβ1在放射性肺损伤发病机制中起到重要作用，间接地反应了放射性肺损伤程度，乌司他丁能通过显著降低TGFβ1的水平，从而抑制炎症反应的发生与发展，有效地防护放射性肺损伤.【关键词

3、】乌司他丁转化生长因子β1肺辐射损伤0引言放射性肺损伤是临床胸部肿瘤放疗、骨髓移植预处理、平时核辐射事故及战时核辐射后严重并发症.研究发现转化生长因子β1（TGFβ1）在放射性肺损伤中起到重要作用［1］.乌司他丁（天普洛安）是一种广谱的蛋白酶抑制剂，能够抑制多种细胞因子及炎症介质，在临床上已经广泛应用于多个领域，我们通过动物实验建立放射性大鼠肺损伤模型，发现乌司他丁能有效降低TGFβ1水平，为治疗放射性肺损伤提供了一种新的方法.1材料和方法1.1材料健康雌性SD大鼠60只，体质量(180±20)g，购于第四军医大学实验动物中心；采用德国西门子公司的6MVX直线加速器

4、；图像采集使用OLYMPUSBX51型号显微镜系统；图像分析使用美国MediaCyberics公司的ImageProPlus6.0图像分析软件；酶标仪使用美国BioRad公司生产的BioRad450型；TGFβ1大鼠酶联免疫吸附测定试剂盒及兔抗大鼠TGFβ1mAb试剂盒购于美国SantaCruz公司；ABC免疫组化试剂盒购于美国Sigma公司；乌司他丁（天普洛安）购于广东天普生化医药股份有限公司.1.2方法1.2.1动物模型制备与实验分组60只雌性SD大鼠随机分为3组（每组20只）：正常对照组（C组）、单纯照射组（R组）、乌司他丁治疗组（U组）.后两组动物经戊

5、巴比妥40mg/kg腹腔麻醉后，以自制的装置固定大鼠，胸部覆以23mm厚蜡块以调整剂量分布，铅屏蔽头部与腹部行直线加速器全胸部照射，单次剂量为20Gy（2Gy/min），距离1m，面积4.5cm×4.5cm.U组于照射当日开始以乌司他丁10000U/kg尾静脉注射，而后每天相同剂量静注，共计7d；C，R组同期尾静脉静注同等体积的生理盐水.1.2.2标本采集于照射后7，15，30，60d每组取5只麻醉后，直接从心脏采血2mL，立刻置入含EDTA的抗凝管中混匀，静置30min后以1500r/min离心15min，留取血浆冻存于-70℃；将大鼠右侧肺门结扎,气管插管,注入生理盐

6、水4mL,保留3min后吸出,反复3次,收集支气管肺泡灌洗液BALF,将BALF4℃离心(3000r/min,4min),吸取上清液冻存于-70℃待测；取右下肺以40g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片.1.2.3肺组织病理学观察各组大鼠肺组织石蜡切片分别行苏木素伊红（HE）染色观察动物肺组织一般病理学改变，每例实验动物选5张切片，运用OLYMPUSBX51显微图像采集系统100倍下每张切片随机选取10个高倍镜视野观察.ImageProPlus6.0（美国MediaCyberics公司）医学图像分析软件进行计算机图像分析，测定肺间质面密度等；同法用Masson染色

7、观察肺组织胶原蛋白沉积情况.1.2.4免疫组化检测TGFβ1的表达取包埋好切片，按试剂盒说明书步骤进行，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体稀释度为（1∶100），DAB显色，苏木素轻度复染核，光镜下观察.结果以胞质内可见棕红色颗粒者为阳性，以肺泡实质TGFβ1阳性表达面积作为检测TGFβ1表达的半定量指标.1.2.5酶联免疫吸附（ELISA）方法测定TGFβ1的含量取冻存的血浆及肺泡灌洗液，按照试剂盒说明书步骤严格操作.统计学处理：采用SPSS12.0统计软件进行数据分析，正态分布数据以x±s表示，行单因素方差分析及SNK