何首乌饮调节衰老大鼠睾丸leydig细胞分泌睾酮的机制

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20101641医学硕士学位论文何首乌饮调节衰老大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的机制学位申请人：宋庆亮指导教师：牛嗣云学位类别：医学硕士学科专业：药理学授予单位：河北大学答辩日期：二0一三年五月ClassifiedIndex:CODE:1010075U.D.C.:NO:20101641ADissertationfortheDegreeofM.SThemechanismofHeshouwuyinregulatingthesecretionoftestoste

2、roneinLeydigcellofagingrattestisCandidate:SongQingliangSupervisor:Prof.NiuSiyunSupervisor:Prof.DuanFeiAcademicDegreeAppliedfor:MasterofMedicalSpecialty:PharmacologyUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:May,2013摘要摘要目的：观察何首乌饮方调节衰老大鼠睾丸Leydig细胞（

3、LC）分泌睾酮的机制方法：根据差速离心贴壁法选用出生10～20d的幼年雄性SD大鼠，无菌取双侧睾丸，用胶原酶Ⅰ消化睾丸组织提取睾丸LC后，采用3β-HSD细胞化学染色进行细胞鉴定；采用含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基培养睾丸LC，并进行如下处理：对培养的LC不做任何处理为正常对照组；用50μmol／LH2O2和100μmol／LFeSO4损伤LC为衰老损伤组；何首乌饮+50μmol／LH2O2和100μmol／LFeSO4处理LC为何首乌饮预防组；50μmol／L的H2O2和100μmol

4、／LFeSO4+何首乌饮处理为何首乌饮治疗组，何首乌培养LC为何首乌饮对照组。应用β-半乳糖苷酶试剂盒检测β-半乳糖苷酶；放免法测睾酮的含量；采用RT-PCR、Westernblotting和免疫荧光法检测Star和P450scc的表达。观察各实验组睾丸LC分泌睾酮的可能机制。结果：1、用3β-HSD细胞化学染色进行鉴定，结果显示细胞纯度为98%以上。2、β-半乳糖苷酶定位在细胞质，阳性细胞呈蓝色。衰老组睾丸LCβ-半乳糖苷酶的阳性率明显高于正常组（P<0.01）；何首乌饮用药组睾丸LCβ-半乳糖

5、苷酶的表达比衰老组明显减少（P<0.05）；而何首乌饮治疗组与预防组之间睾丸LCβ-半乳糖苷酶的表达无明显差别（P>0.05）；正常组与何首乌对照组之间无明显差异（P>0.05）。3、衰老组睾酮含量明显低于正常组和何首乌饮对照组(P<0.01)；何首乌饮治疗组和预防组睾酮含量高于衰老组(P<0.05）；而何首乌饮治疗组与预防组之间睾酮含量无明显差别（P>0.05）；正常组与何首乌对照组之间无明显差异（P>0.05）。4、衰老组Star和P450scc的表达明显低于正常对照组和何首乌饮对照组(P<0

6、.01)；正常对照组和何首乌饮对照组之间没有明显的差别（P>0.05）；何首乌饮治疗组、何首乌饮预防组均能明显提高睾丸LCStar和P450scc的表达，与衰老组相比有显著性差异(P<0.05)，而何首乌饮治疗组与预防组之间无明显差别（P>0.05）。结论：I摘要1.成功的建立了大鼠Leydig细胞衰老模型。2.首乌饮能够显著降低衰老Leydig细胞β-半乳糖苷酶的含量。3.何首乌饮能够提高衰老Leydig细胞分泌睾酮的能力4.何首乌饮能够提高衰老大鼠Leydig细胞P450scc、Star表达。

7、关键词：睾丸LCβ-半乳糖苷酶何首乌饮StarP450scc睾酮IIAbstractAbstractObjective：ToobservethemechanismofHeshouwuyinregulatingthesecretionofLeydigcellinagingrattestis.Method：Basedondifferentialcentrifugationadherent,wetook10-20daysmaleSDratsbothtestissterily,thendigestived

8、bycollagenasefortestisLeydigcell.Leydigcellweretestifiedby3β-HSDCytochemicalstaining.TestisLeydigcellwereculturedin10%Fetalbovineserumculturemediumandinterferedasfollowings:noneinterferedLeydigcellwasnormalgroup;Leydigcelldamagedby50μmol／LH2O2