dnl细胞制备及抗瘤机制

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1、DNL细胞制备及抗瘤机制徐骎口腔临床免疫教研室口腔肿瘤生物实验室第一部分DNL细胞的制备一、概况口腔颌面部肿瘤——综合序列治疗免疫治疗是重要手段之一机体细胞免疫主要执行抗肿瘤免疫效应抗肿瘤的免疫细胞——NK，LAK，TIL，DNL等NK——naturekillercells自然杀伤细胞LAK——lymphokineactivatedkillercells淋巴因子激活的杀伤细胞TIL——tumorinfiltratinglymphocyte肿瘤浸润性淋巴细胞DNL——draininglymphnodelymphocyte肿瘤引流区淋巴结细胞TIL与DNL相同点1）邻近肿瘤2）强大的抗

2、肿瘤效应，比LAK细胞高50-100倍3）良好的基因治疗载体不同点1）来源不同2）TIL细胞数量少，易污染DNL细胞数量多二、实验目的1、掌握从淋巴结中分离、培养、扩增DNL的基本方法2、明确DNL与TIL的异同点三、实验材料1、材料：口腔鳞癌颈清淋巴结2、器材：显微镜、离心机、超净台、培养皿、离心管、吸管、培养瓶、尼龙网（200目）3、试剂：培养液（RPMI1640）、Hank’s液（含1000u/ml青、链霉素，1000u/ml两性霉素）四、实验内容1、DNL的分离淋巴结酶消化法——0.5%胶原酶Ⅱ、0.02%DNA酶、0.05%透明质酸酶Ⅳ机械法密度梯度离心DNL2、DNL的

3、培养和扩增1）培养液——RPMI1640+rIL-22000u/ml2）培养条件——DNL6×106/ml，37℃，5%CO23）3-5天换液，每次换液加入rIL-22000u/ml，细胞浓度保持在6×106/ml四、实验内容细胞计数血细胞计数器：手工计数细胞Coulter计数仪：自动计数1091012[（10+9+10+12）/4]*104=10.25*104/ml(稀释倍数)第二部分DNL抗瘤机制以往的研究表明：DNL分泌穿孔素肿瘤细胞通透性增加最新研究证实：CTL分泌穿孔素和颗粒酶A（granzymeA）granzymeA激活下游信号传导通路肿瘤细胞凋亡DNL体外杀伤口腔鳞癌

4、细胞的作用观察——MTT法原理：1、MTT——二甲基噻唑二苯基四唑溴盐2、活细胞线粒体脱氢酶MTT结晶形成少，反映活细胞少，杀伤肿瘤细胞作用强不可溶性紫色甲臜DMSO溶解，检测OD值MTT结晶MTT结晶DMSO溶解结晶小结DNL与TIL异同点DNL制备方法DNL抗肿瘤机制