卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究-论文.pdf

《卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、·462·临床儿科杂志第32卷第5期2014年5月JClinPediatrVoi．32No．5May．2014doi：10．3969／j．issn．1000—3606．2014．05．017·论著·卡介苗HSP70基因转染HL．6O细胞瘤苗制备及抗瘤初制的研究李晓玲刘春雷孙立荣1．临沂市人民医院儿内三科(山东临沂276000)；2．临沂市人民医院网络与数据中心(山东临沂276000)；3．青岛大学医学院附属医院小儿血液科(山东青岛266003)摘要：目的构建卡介苗(BCG)热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体，通过基因转染表达HL一60细胞表面，研究其抗瘤作用和机制。方法利用多聚酶链反

2、应(PCR)方法扩增P7D基因，与真核表达载体pDisplay连接，构建重组载体pDisplay-HSP70，并利用脂质体2000将其转染HL一60细胞。HL-60细胞分为未转染的HL60一wt组、转染空载体pDisplay的HL60-pDisplay组、转染重组载体pDisplay—HSP70的HL60-HSP70组，分别与外周血T淋巴细胞培养72h，羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数，ELISA法检测IFN一水平；各组HL一60细胞与T淋巴细胞混合培养6d后获细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应细胞，加入HL一6O靶细胞以不同效靶比共培育12h，L

3、DH释放改良法检测CTL细胞杀伤活性。结果扩增获得的HSP70基因大小与理论值一致，重组载体pDisplay—HSP70构建正确。HSP70表达在转染后的HL一60细胞表面。转染后的HL-60细胞，即HL60-HSP70组能明显促进异体T细胞扩增，该组CFSE阳性率、IFN一含量、CTL杀伤率均高于HL60一wt和HL60一pDisplay组，差异均有统计学意义(P<0．05)；后两组间差异则无统计学意义(P>0．05)；随效靶比增大，HL60-HSP70组CTL细胞杀伤活性逐渐增强，差异有统计学意义(P

4、GHSP70的HL一60细胞瘤苗，HSPTO基因转染后能明显增强HL一60细胞的免疫原性。关键词：卡介苗；热休克蛋白70；基因转染；HL-60；肿瘤疫苗PreparationofHL一60cellvaccineexpressingBCG—HSP70anditsanti—leukemiaeffect1,1Xiaolinf．LlUChunlei2,SUNLirong3f1．DepartmentoftheThirdPediatrics．TheLinyiPeople'sHospital,Linyi276000,Shandong,China；2．Depart-mentofTheNetworkandDa

5、taCenter,TheLinyiPeople'sHospital,Linyi276000,Shandong,China,"3．DepartmentofPediatricHematology,TheAfiliatedHospitalofMedicalCollege,QingdaoUniversity,"Qingdao266003，Shandon&ChinAbstract：ObjectivesTopreparetheHL-60cellvaccineexpressingheatshockprotein70(HSP70)ofBacillecalmette·-Gu6rin(BCG)，soastost

6、udyitsanti—tumorefectandmechanism．MethodsThewholeBCGHSP70genewasamplifiedfromBCGgenomebypolymerasechainreaction(PCR)andsub—clonedintothepolycloneendonucleasesitesinpDisplay．Therecom—binantvectorofpDisplay—HSP70wasverifiedbysequencing．ThentheHL一60cellvaccineexpressingtheproteinontothecellsurfacewasp

7、reparedbylipofectaminetransfection．TodetecttheimmunogenicityofHL一60cellsexpressingHSP70，thetestgroupsweredividedintothreesubgroups，HL60一wt，HL60一pDisplay,andHL60一HSP70respectively．Eachgroupwasculturedwithper