cd40l对人结肠癌细胞hct-116生长抑制作用及其机制的实验研究

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1、7‘7908本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：j冱雎日期：-7．．OLO、r∥37：jY》℃￡苏州大学学位论文使用授权声明lI(E[IIIlllIIIIrlrIfIY1731409本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，学位论文著作权归属苏州大

2、学。本学位论文电子文档的内容和纸文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年一月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：逾丝拿日导师签名：隆毽日中文摘要抑制作用及其机制细胞株增殖和凋亡的影响，．0ug／ml、3．0I．tg／m1)的CD40L镜观察细胞生长情

3、况，MTT比色法测定计算各实验组和对照组细胞的生长抑制率，流式细胞术(FCM)检测CD40L对HCT．116细胞周期和细胞凋亡的影响，RT-PCR半定量法检测VEGF、bcl．2及fasmRNA的表达水平，WestemBlot法测定肿瘤细胞中细胞内VEGF、Bcl．2及Fas蛋白的表达情况。结果：(1)MTT法显示一定浓度的CD40L可抑制HCT．116细胞增殖，抑制作用呈时间和剂量依赖性，实验组与对照组及各实验组之间比较均有统计学意义(胙0．05)。(2)FCM结果显示，HCT．116经CD40L作用48小时后，细胞有明显凋亡，且随浓度的增加和

4、作用时间延长而增强，G2／M期细胞比例上升，Go／G1期细胞比例下降，呈剂量依赖性(正0．05)。(3)RT．PCR法显示，HCT—l16细胞的fasmRNA随CD40L浓度增加而表达增加，VEGF、bcl．2mRNA随药物浓度增加表达下降(西0．05)。(4)WesternBlot法结果显示，随着不同浓度的CD40L处理48h后，HCT．116细胞中VEGF、Bcl．2蛋白表达下降，Fas蛋白表达升高(卿．05)。结论：(1)CD40L可以抑制体外培养的人结肠癌HCT．116细胞生长，具有时间和剂量依赖性，将细胞周期阻滞于G2／M期，诱导细胞凋

5、亡。(2)CD40L对HCT．116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与上调Fas基因转录和蛋白表达，下调VEGF、Bcl．2基因转录和蛋白表达有关。关键词：CD40L；结肠癌；细胞凋亡；Fas；Bcl．2；VEGF作者：汤世军指导老师：汪良英文摘要CD40L对人结肠癌细胞HCT-116生长抑制作用及其机制的实验研究ThestudyofgrowthinhibitoryeffectanditsmechanismsofCD40LonhumancoloncancercelllineHCT．116AbstractObjective：Tostudytheant

6、i—tumoreffectanditsmechanismsofCD40LonhumancoloncarcinomacelllineHCT．116invitro．Methods：Invitro，exponentialphasehumancoloncarcinomacelllineHCT-I16wastreatedbyCD40Lindifferentconcentrations(0．1ug／ml，0．5ug／ml，1．0Ug／ml，2．0ug／ml，3．0I．tg／m1)．CellmorphologychangesWasobservedbyoptic

7、almicroscopy．BymeansofMTTassay，theabsorbancevalueWasdetectedandinhibitionratewascalculate；cellcyclesandapoptosiswereanalyzedbyflowcytometry(FCM)；themRNAexpressionsofVEGF、bcl-2、faswereanalyzedbyreversetranscriplasepolymerasechainreaction(RT—PCR)；Immunohistochemistrywasusedtode

8、tectVEGF、Bcl一2、Fasproteinexpression．Results：(1)MTI"assayindicatedtha