斑蝥酸钠对人宫颈癌hela细胞凋亡相关基因表达的影响

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1、斑蝥酸钠对人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达的影响【摘要】目的研究斑蝥酸钠对人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因BCL-2表达的影响。方法采用ethods:TheexpressionlevelsofBCL-2easuredbyI1640培养基(美国Gibco公司)；一抗：BCL-2、抗GAPDH抗体（proteintech,USA）；HRP标记羊抗兔二抗（Abcam,USA）。1.2方法1.2.1细胞培养和分组：Hela细胞以10%胎牛血清的RPMI1640培养基置于37℃、5%的CO2孵育箱中常规培养。取指数生长期细胞进行实验，血清饥饿法使细胞同步化，分别加入各处理条件的含有斑蝥酸钠培养

2、液2ml，培养24h备用。实验分为正常对照组（control，n=5）、斑蝥酸钠处理高、中、低剂量组（5.0,2.5,1.0mg/L，n=5）。1.2.2in，12000×g离心10min收集细胞总蛋白，定量调整蛋白浓度一致，加入上样缓冲液，100℃变性5min。蛋白样品经12%SDS-PAGE电泳分离，电转移至PVDF膜，室温封闭2h，分别加入一抗：BCL-2（1∶800）、抗GAPDH抗体（1∶2000），4℃孵育过夜，TBST洗膜，加二抗（1∶7000）室温孵育2h，洗膜后加入ECL发光，常规显影，每个样本重复3次。BCL-2的表达水平以图像BCL-2与GAPDH的灰度比(BCL-

3、2/GAPDH)表示，比值越大，BCL-2的表达水平越高。1.2.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件,数据以mean±SD表示，组间比较采用单因素方差分析，p<0.05具有显著性差异。2结果不同浓度的斑蝥酸钠对Hela细胞中BCL-2表达的影响见附表：与对照组相比，斑蝥酸钠高中低剂量组均受到明显抑制(P<0.05)，并呈剂量依赖，随着斑蝥酸钠浓度的增加，斑蝥酸钠对BCL-2表达的抑制作用逐渐增强。结果提示低剂量组对Hela细胞BCL-2表达的抑制程度较低，中高剂量组抑制作用更为明显。附表各组细胞中BCL-2的表达(BCL-2/GAPDH，x±s,n=5）组别剂量mg/L

4、BCL-2/GAPDH正常对照组00.162±0.015斑蝥酸钠低剂量组1.00.144±0.0081)高剂量组5.00.086±0.0091,2,3)与对照组比较1)p<0.01,与低剂量组比较2)p<0.01,与中剂量组比较3)p<0.05。3讨论有研究表明，斑蝥酸钠可以诱导多种肿瘤细胞凋亡[3,4]，细胞凋亡主要依赖三种信号转导途径[5]，线粒体被认为是处于凋亡调控的中心位置，线粒体依赖凋亡途径主要是凋亡刺激信号引起细胞损伤后，细胞色素c从线粒体释放，引发线粒体内凋亡分子Caspases级联反应，最终诱导细胞产生凋亡。细胞线粒体细胞色素C等凋亡分子的释放受凋亡相关

5、基因的调控，Bcl-2家族是了解较深入的与细胞凋亡调控有关的基因。目前认为绝大多数凋亡信号最终都通过Bcl-2蛋白家族与线粒体联系。Bcl-2家族即细胞淋巴瘤/白血病-2基因，是研究最早的与凋亡有关的基因，在细胞凋亡的线粒体途径中起重要调控作用。Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xl等为抗凋亡蛋白，而BAX等为促凋亡蛋白，Bax和Bcl-2为同源蛋白,两者通过不同比例形成同/异二聚体来调节细胞凋亡，控制着上游凋亡信号进入线粒体[6,7]。斑蝥酸钠诱导Hela细胞凋亡的分子机制研究目前少有报道，有研究表明：斑蝥酸钠对Hela细胞生长有明显抑制杀伤作用，可诱导Hela细胞凋亡，达到治疗肿瘤

6、的目的。本研究采用edChem.2009,9(4):392-6.[6]赵婧,屈艺,母得志.Akt与细胞线粒体凋亡途径[J].生命的化学2010,30(4):528-32.[7]李捷萌,陈彦青.线粒体凋亡途径与Bcl-2家族蛋白研究进展[J].医学综述2008,14(4):489-90.