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时间:2020-04-22
《鸡滑液支原体LAMP快速可视化检测方法的建立-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第36卷第1期中国预防兽医学报Vo1.36.NO.12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan.2014doi:10.3969~.issn.1008—0589.2014.01.12鸡滑液支原体LAMP快速可视化检测方法的建立邓显文,谢芝勋,谢志勤,刘加波,庞耀珊,谢丽基,范睛,罗思思f广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁530001)摘要:为建立能够快速检测鸡滑液支原体(Ms)的检测方法,本研究根据GenBank中MS热休克ATP依赖蛋白酶基因
2、的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了MS的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10z拷贝DNA,高于常规PCR方法lO倍;全部反应可以在1h内完成;可以通过肉眼观察钙黄绿素颜色变化直接判定结果;对其它常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可以用于MS感染的快速检测。关键词:鸡滑液支原体;LAMP;检测中图分类号:$852.6文献标识码:A文章编号:1008-0589(2014)01-0046—04Developmentofaloop—mediate
3、disothermalamplificationassayforvisualdetectionofMycoplasmasynoviaeDENGXian.wen,XIEZhi—xun,XIEZhi—qin,LIUJia-bo,PANGYao—shan,XIELidi,FANQing,LUOSi—si(GuangxiVeterinaryResearchInstitute,GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology,Nanning530001,China)Abstrac
4、t:ToestablishrapiddetectionmethodforMycoplasmasynoviaedetection,aloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)assaywasdevelopedwithasetofprimersdesignedaccordingtotheconservativesequenceoftheheatshockATP—dependentproteasegeneofM.synoviaeinGenBank.Undertheoptimizedreac
5、tionconditions,theamplificationcompletedwithinonehourinaconstantwaterbathat62℃.ThedetectionresultsshowedthattheassaywasspecifictoM.synoviaewithadetectionlimitof10copies,whichwashigherthantheroutinePCR,andnocross-reactionswiththeotherpathogenofchicken.Inaddition,the
6、positiveresultwasvisibleinpresenceofCalcein.ThesedatasuggestthatthisLAMPassayisasimpleandspecificmethodforrapiddetectionofM.synoviaeinclinicalsamples.Keywords:Mycoplasmasynoviae;LAMP;detection滑液支原体(Mycoplasmasynoviae,MS)以侵害然快速、敏感性较高,但是需要使用昂贵的仪器和鸡关节滑液、腱鞘膜和气囊为主,引起鸡亚临
7、床型试剂等。环介导等温扩增技术(LAMP)具有简捷、成的上呼吸道感染和关节滑液囊炎。鸡群感染该病可本低廉和结果可视化等优点『5],目前在一些病原微以导致明显的跛行,生长发育迟缓及胴体降级等⋯。生物的检测中被广泛应用[6-13]。目前,国内外还没有快速检测MS是采取紧急防制措施和净化MS的前应用LAMP检测鸡MS的研究报导。本实验以MS提。目前MS.PCR检测技术已有报道,该方法虽热休克ATP依赖的蛋白酶(HeatshockATP.dependent*Correspondingauthor收稿日期:2013.02—20基金项目
8、:广西特聘专家专项(2011B020);国家百千万人才工程人选专项(945200603);广西科技重大专项(1222003-2—4)作者简介:邓显文(1963一),男,广西贺州人,研究员,主要从事动物分子生物学研究.通信作者:E.mail:xiezhixun@126.corn第1期邓显文,
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