核桃青皮多糖超声辅助提取工艺及抗氧化活性研究

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1、核桃青皮多糖超声辅助提取工艺及抗氧化活性研究摘要：以多糖得率为指标，水料比、提取时间、提取温度为考察因素，在单因素试验的基础上，采用响应面法对核桃（JuglansregiaL.）青皮多糖超声辅助提取工艺进行优化，并对核桃青皮多糖清除羟基自由基和超氧阴离子自由基活性进行了分析。结果表明，核桃青皮多糖超声辅助提取最佳工艺条件为：水料比18∶1（V∶m）、提取时间31min、提取温度80℃、提取2次，在此条件下多糖得率为9.02%；核桃青皮多糖对羟基自由基及超氧阴离子自由基均有一定的清除活性，但其清除作用小于维生素C。关键词：核桃（Juglans

2、regiaL.）青皮；多糖；超声辅助提取；响应面法；抗氧化活性中图分类号：S664.1；O629.12文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）05-1148-0511多糖（Polysaccharide）是指聚合度超过10以上的多聚糖，是广泛存在于动物、植物及微生物中的一类大分子化合物，具有许多重要的生物活性，如参与细胞骨架的构成，同时它也是多种内源性生物活性分子的组成成分[1]。研究发现，多糖具有抗肿瘤、抗衰老、抗感染、降血糖血脂、治疗艾滋病等功效[2]，其免疫调节作用是主要作用，所以又叫免疫活性多糖[3]。目前，多糖已经成为

3、当今医药研究领域的重要组成部分。核桃（JuglansregiaL.）是我国重要的经济林树种之一[4]，我国核桃栽培面积及产量均居世界首位。核桃富含蛋白质、维生素、亚油酸等[5]。在食用和生产过程中，核桃利用部位主要为其种仁，大量的青皮被废弃，但现有研究显示核桃青皮中也富含许多生物活性成分[6]。因此，如能从核桃青皮中提取具有免疫活性的多糖，可实现资源化利用。本研究对核桃青皮多糖的超声辅助提取工艺进行优化，并对其体外抗氧化活性进行了研究。1材料与方法1.1材料和试剂材料：核桃青皮2012年购于山西古县，清洗干燥后粉碎，过60～80目筛，备用。

4、试剂：AB-8大孔吸附树脂、石油醚、三氯甲烷、正丁醇、无水乙醇、硫酸亚铁、水杨酸、过氧化氢、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、邻苯三酚、抗坏血酸，所用试剂均为分析纯。1.2方法1.2.1多糖的提取参照刘岿等[7]的方法进行多糖的提取，核桃青皮样品经石油醚回流脱脂后，加入一定体积的蒸馏水（水料比为5∶1～25∶1，V∶m），水浴（50～90℃）超声提取（10～9011min），提取2次，过滤后合并滤液减压浓缩，用Sevag法除去蛋白质，3倍体积95%的乙醇沉淀多糖，真空干燥沉淀，即得到核桃青皮粗多糖。1.2.2多糖含量的测定采用蒽酮-硫酸法测定多糖的含

5、量[8]，以葡萄糖作为标准品，采用紫外可见分光光度法在625nm波长下测定吸光度，以吸光度值（Y）为纵坐标，葡萄糖浓度（X）为横坐标绘制葡萄糖溶液标准曲线，得到方程为Y=3.48X+0.0008，R2=0.9996。核桃青皮多糖得率为：R=m1/m2×100%式中m1为粗多糖中多糖质量；m2为原料干重。1.2.3超声辅助提取核桃青皮多糖最佳条件的确定根据水料比、提取时间、提取温度3个单因素试验所确定的水平范围，应用Design-Expert7.0软件，根据Central-Composite中心组合试验设计原理，设计3因素3水平的响应面试验，

6、利用响应面试验结果，确定核桃青皮多糖的最佳提取条件，试验具体因素与水平见表1。1.2.4核桃青皮粗多糖的精制参照仰榴青等[9]、朱建飞等[10]的方法，准确称取按照“1.2.1”中方法制备的核桃青皮粗多糖400mg，溶于200mL蒸馏水中，过AB-8大孔吸附树脂柱，蒸馏水洗脱200mL，流速1mL/min。将纯化后的多糖溶液浓缩干燥至恒重，用于抗氧化活性的分析。1.2.5核桃青皮多糖抗氧化活性的测定1）清除羟基自由基活性的测定采用水杨酸法[11，12]测定羟基自由基的清除率。在1011mL比色管中依次加入9mmol/LFeSO4溶液2mL，

7、9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2mL和不同浓度的多糖或维生素C溶液2mL，8.8mmol/LH2O2溶液2mL。充分混匀后于37℃水浴30min，于波长510nm处测定吸光度，以加蒸馏水为空白对照，用以下公式计算羟基自由基的清除率：R=[（Ao-Ai）/Ao]×100%式中，Ao表示空白对照的吸光度；Ai表示加入抗氧化剂体系的吸光度。2）清除超氧阴离子活性的测定采用邻苯三酚自氧化法[13]测定超氧阴离子的清除率。将50mmol/LTris-HCl（pH8.2）的缓冲液4.5mL置于25℃水浴中预热25min，依次加入不同浓度的多糖或维生素C

8、溶液各1mL，2.5mmol/L邻苯三酚溶液0.4mL。混匀后，在4min内于波长325nm处每隔30s测定溶液的吸光度，计算邻苯三酚溶液的吸光度随时间的变化率K，以蒸馏水为空白