分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样中双酚论文

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1、分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样中双酚论文【摘要】建立了分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样中双酚A的分析方法。通过交互正交试验和混合型优化实验设计对影响因素(萃取剂体积、分散剂类型及其体积、水样体积、pH值及离子强度)进行了优化。优化后的分散液液微萃取条件为：60μL萃取剂，0.4mL分散剂(甲醇)，pH4.0;优化后的柱前衍生化条件：0.1mL2.0g/L衍生剂(对硝基苯甲酰氯)、衍生化时间30min;方法的线性范围：0.002～0.2mg/L(r=0.9997)，检出限0.007μg/L(S/N=3);不同浓度双酚A

2、的萃取率为59.0%～63.0%，相对标准偏差(RSD)2.5%～9.2%(n=5);水样中双酚A的加标率为86.5%～107.1%，RSD为4.0%～11.9%(n=5)，其它雌激素(雌酮、雌二醇、雌三醇和17α乙炔基雌二醇)对双酚A的测定无干扰。本方法可以对水环境中的痕量BPA进行检测，具有操作简便、快速等优点。【关键词】分散液液微萃取.freeladi等12发明的分散液液微萃取(DLLME)技术，因具有环境友好、操作简单等优点而被广泛应用于环境样品的萃取分离13,14。柱前荧光衍生可显著提高BPA荧光效率及检测灵敏度15，BPA衍生化测定方法

3、已有报道15，16，但衍生化反应需在无水条件下进行，往往需要脱水和氮气缓慢吹扫、挥干等步骤。本研究采用DLLME技术对水样中BPA进行萃取，对离心后得到的沉淀相(有机相)中的BPA进行衍生化反应，从而简化衍生化过程，最后利用HPLC分析衍生化样品中的BPA。本方法可于室温下进行，操作简便、快速。2实验部分2.1仪器与试剂1200型HPLC(美国Agilent公司)，配备Rheodyne7725i手动进样器、真空脱气装置、二元泵、柱温箱及荧光检测器;TCC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);DELTA320梅特勒托利多pH计;216PK

4、冷冻离心机(德国Sigma公司)。BPA、雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)及17α乙炔基雌二醇(EE2)均购自Sigma公司;C6MIMPF6(99%);丙酮、甲醇和乙腈为色谱纯;NaCl和NaOH为分析纯;2.0g/L对硝基苯甲酰氯(≥98.0%)乙腈溶液。200mg/LBPA储备液，置于4℃冰箱中保存备用。实验用水由DirectQ3UV(法国Millipore公司)制备。2.2分散液液微萃取样品的制备准确移取适量BPA(0.02mg/L)使用液于10mL锥形玻璃离心管内，用1mL注射器将萃取剂(C6MIMPF6)和分散剂(丙酮或甲

5、醇)混合液快速注入到离心管内的BPA溶液中，形成混浊液，轻轻摇晃，以5000r/min离心8min，用50μL进样针抽取沉淀相5μL，进样。2.3分散液液微萃取样品的衍生化准确移取分散液液微萃取样品的沉淀相10μL于棕色样品瓶中，加入0.10mL对硝基苯甲酰氯乙腈溶液，摇匀，于暗处放置30min后，抽取上清液5μL，进样。2.4色谱条件流动相为甲醇和水，梯度洗脱：0～5min，70%甲醇;5～10min，85%甲醇;10～18min为后运行时间。流速：1.0mL/min;柱温：30℃;荧光检测：λex=230nm，λem=315nm。3结果与讨论3.

6、1分散液液微萃取条件优化考察萃取剂体积(A)，水样体积(B)，分散剂类型(C)，pH值(D)，离子强度(E)，和分散剂体积(F)6个因素，选取的水平依次为A：60，90μL;B：3，5mL;C：甲醇、丙酮;D:4.0，7.0，E:0，0.4mol/kg;F:0.4，0.6mL。3.1.1显著因素的筛选选取L16(215)正交表进行分析，任意次序完成正交表中的16组实验，每组设两个平行及空白对照，以平行样BPA浓度的平均值与空白实验的差为指标值(Yi)，空白列用于估算实验误差，各影响因素的显著性见表1。从表1看出，对Yi影响显著的因素包括水样体积、萃取

7、剂体积、分散剂类型以及水样体积与萃取剂体积的交互作用(A×B)。根据Yi变化趋势，分散剂类型确定为甲醇;A×B的作用小于因素A和B的单独作用，则进一步的实验着重优化因素A和B。不显著因素确定为pH4.0、不调节离子强度及分散剂体积0.4mL。表1交互正交试验结果的方差分析3.1.2混合型优化实验萃取剂体积(A)和水样体积(B)对Yi的效应相反，分别为正效应和负效应。实验表明，萃取剂体积50μL和水样体积9mL时，得到沉淀相小于2μL，难以取样。为使Yi最大，同时又容易进行取样操作，A水平设50与60μL，B设5，6与7mL。采用混合型21×31设计进

8、行优化(图1)：确定水样体积(B)为7mL;当萃取剂体积(A)为50和60μL时，BPA萃取率(ER)约分别