分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样

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1、分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样【摘要】建立了分散液液微萃取柱前衍生高效液相色谱法测定水样中双酚A的分析方法。通过交互正交试验和混合型优化实验设计对影响因素(萃取剂体积、分散剂类型及其体积、水样体积、pH值及离子强度)进行了优化。优化后的分散液液微萃取条件为：60μL萃取剂，0.4mL分散剂(甲醇)，pH4.0;优化后的柱前衍生化条件：0.1mL2.0g/L衍生剂(对硝基苯甲酰氯)、衍生化时间30min;方法的线性范围：0.002～0.2mg/L(r=0.9997)，检出限0.007μg/L(S/N=3);不同

2、浓度双酚A的萃取率为59.0%～63.0%，相对标准偏差(RSD)2.5%～9.2%(n=5);水样中双酚A的加标率为86.5%～107.1%，RSD为4.0%～11.9%(n=5)，其它雌激素(雌酮、雌二醇、雌三醇和17α乙炔基雌二醇)对双酚A的测定无干扰。本方法可以对水环境中的痕量BPA进行检测，具有操作简便、快速等优点。【关键词】分散液液微萃取，柱前衍生，高效液相色谱，双酚A1引言　　双酚A(BisphenolA，BPA)是生产聚碳酸酯、环氧树脂的重要原料，可用于树脂和阻燃剂生产[1]。BPA属于“环境激素”，具有雌激素效

3、应，ng/L～μg/L水平就会对人类和野生动物的健康带来威胁[2,3]。　　BPA检测方法有高效液相色谱法(HPLC)[4]、分子印迹法(MIPM)[5～7]、气相色谱质谱法(GCMS)[8]、酶联免疫吸附法(ELISA)[9]等。由于BPA在水环境中浓度较低[10]，常采用液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、液相微萃取(LPME)和固相微萃取(SPME)等预处理方法进行富集，其中SPME和LPME较为常用，具有消耗溶剂少或无需萃取剂、富集效果好、方便等优点，但也存在诸如SPME的萃取头价格昂贵、易碎，LPME平衡时间较长

4、等不足[10,11]。Ahmadi等[12]发明的分散液液微萃取(DLLME)技术，因具有环境友好、操作简单等优点而被广泛应用于环境样品的萃取分离[13,14]。柱前荧光衍生可显著提高BPA荧光效率及检测灵敏度[15]，BPA衍生化测定方法已有报道[15，16]，但衍生化反应需在无水条件下进行，往往需要脱水和氮气缓慢吹扫、挥干等步骤。　　本研究采用DLLME技术对水样中BPA进行萃取，对离心后得到的沉淀相(有机相)中的BPA进行衍生化反应，从而简化衍生化过程，最后利用HPLC分析衍生化样品中的BPA。本方法可于室温下进行，操作简便

5、、快速。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂　　1200型HPLC(美国Agilent公司)，配备Rheodyne7725i手动进样器、真空脱气装置、二元泵、柱温箱及荧光检测器;TCC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);DELTA320梅特勒托利多pH计;216PK冷冻离心机(德国Sigma公司)。　　BPA、雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)及17α乙炔基雌二醇(EE2)均购自Sigma公司;[C6MIM][PF6](99%);丙酮、甲醇和乙腈为色谱纯;NaCl和NaOH为分析纯;2.0g/L对硝基苯甲

6、酰氯(≥98.0%)乙腈溶液。200mg/LBPA储备液，置于4℃冰箱中保存备用。实验用水由DirectQ3UV(法国Millipore公司)制备。　　2.2分散液液微萃取样品的制备　　准确移取适量BPA(0.02mg/L)使用液于10mL锥形玻璃离心管内，用1mL注射器将萃取剂([C6MIM][PF6])和分散剂(丙酮或甲醇)混合液快速注入到离心管内的BPA溶液中，形成混浊液，轻轻摇晃，以5000r/min离心8min，用50μL进样针抽取沉淀相5μL，进样。　　2.3分散液液微萃取样品的衍生化　　准确移取分散液液微萃取样品的

7、沉淀相10μL于棕色样品瓶中，加入0.10mL对硝基苯甲酰氯乙腈溶液，摇匀，于暗处放置30min后，抽取上清液5μL，进样。　　2.4色谱条件　　流动相为甲醇和水，梯度洗脱：0～5min，70%甲醇;5～10min，85%甲醇;10～18min为后运行时间。流速：1.0mL/min;柱温：30℃;荧光检测：λex=230nm，λem=315nm。　　3结果与讨论　　3.1分散液液微萃取条件优化　　考察萃取剂体积(A)，水样体积(B)，分散剂类型(C)，pH值(D)，离子强度(E)，和分散剂体积(F)6个因素，选取的水平依次为A：6

8、0，90μL;B：3，5mL;C：甲醇、丙酮;D:4.0，7.0，E:0，0.4mol/kg;F:0.4，0.6mL。　　3.1.1显著因素的筛选选取L16(215)正交表进行分析，任意次序完成正交表中的16组实验，每组设两个平行及空白对照，以平行