体外受精和胚胎移植技术的初步成功

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1、体外受精和胚胎移植技术的初步成功江苏医药1999年第11期第25卷论著、经验交流作者:刘嘉茵 冒韵东 杨健之 杨乃明 傅士龙 洪 蕾 刘翠珍单位:江苏省人民医院妇产科 邮政编码:210029 南京医科大学生殖医学重点实验室关键词:体外受精和胚胎移植 妊娠 分娩  摘要 我院自1998年1月至1998年8月共进行了16例19个周期的取卵和体外受精,共胚胎移植(ET)17例次;获4例妊娠,其中3例临床妊娠,1例生化妊娠,临床妊娠中1例于孕70天流产;平均每周期取卵7.6个,受精率63.9%,卵裂率72.2%,每

2、周期ET率94.7%,临床妊娠率(每取卵周期)3/19,活胎率(每取卵周期)2/19。第一例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴;第二例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。“试管婴儿”技术在我省获得成功,标志着江苏省生殖医学辅助生育技术的水平又上了一个新的台阶。  我院妇产科和南京医科大学省生殖医学重点实验室已于1998年9月和1999年1月先后成功获得江苏省两例“试管婴儿”的足月分娩。本文报告我们在体外受精和胚胎移植技术开展初始阶段的体会。  方  法  一、病例的选择  自199

3、8年1月至1998年6月,我们共进行了16例病人19个周期的取卵和体外受精,病人平均年龄30.5岁,不育年限平均5年,不育原因包括输卵管因素10例,子宫内膜异位症1例,卵巢因素1例,垂体衰竭1例,不明原因不孕3例。  二、控制性促超排卵方案  1.长方案 自前次月经周期的第21天起,皮下注射长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诺雷德3.6mg或达必佳3.75mg。自月经周期第二天起肌肉注射促性腺激素FSH150~225单位,每日1次,直至卵泡发育成熟。  2.短方案(flareup) 自月经周期第2

4、天开始,每日皮下注射短效GnRH-a达必佳0.1mg,肌肉注射促性腺激素FSH150单位,直至卵泡发育成熟。  3.卵泡发育监测 自月经周期第8天起每天B超阴道探头观察和测量卵泡直径。自优势卵泡直径达14mm时,每日测尿LH值,监测隐匿性的LH峰值的出现。当4个卵泡直径达16mm,或3个卵泡直径达17mm,或2个卵泡直径达18mm时,肌肉注射hCG10000单位。  三、取卵和检卵  hCG注射36小时后,在B超阴道探头的引导下,用17号取卵针(Cook公司)负压抽吸卵泡液,在解剖显微镜下迅速检出被卵丘颗粒

5、细胞包绕的卵子,用含10%人血清的HTF培养液(美国欧文公司)洗涤后,在5%的CO2培养箱37℃孵育4~6小时。  四、精子的处理和体外受精  1.精子处理 采用Percoll梯度离心法将精子离心洗涤后收集。  2.体外受精 将处理过的精子按每个卵子10~30万条精子的比例,采用液滴法将精子加到每个含1个卵子的HTF培养液滴中去,表面覆盖矿物油层。置5%CO2培养箱中37℃孵育培养。  3.加精后12~16小时将卵丘颗粒细胞拆去,观察卵子是否受精。在倒置显微镜下看到2个原核,判为受精[2,3]。  五、体外

6、培养和胚胎移植  将受精卵换入含10%人血清的HTF培养液滴,在5%CO2培养箱37℃继续培养。观察受精卵发生卵裂到4~8细胞胚胎时(通常在受精后的24~48小时),将2~4个胚胎用专用ET导管(Cook公司)移植入母亲子宫腔。移植后母亲用hCG,用黄体酮建黄体,及安胎治疗。  结  果  2例体外卵未受精;共胚胎移植(ET)17例次,共获4例妊娠,其中3例临床妊娠,1例生化妊娠。临床妊娠中1例于孕70天流产。平均每周期取卵7.6个,受精率63.9%,卵裂率72.2%,每周期ET率94.7%,临床妊娠率(每

7、取卵周期)3/19,活胎率(每取卵周期)2/19。第1例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴;第2例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。  讨  论  “试管婴儿”的成功标志着江苏省生殖医学领域又上了一个新的台阶。体外受精和胚胎移植是一项学术性强、对生殖内分泌的理论、临床水平、实验室操作、设备环境条件要求较高的辅助生育技术,每个技术环节对妊娠的成功率和活胎率都有重要的影响。在首批患者的治疗实践中,我们积累了一定的经验和教训。  1.促排卵方案近年来有较大的进展,从卵泡的募集到卵子的成

8、熟,从子宫内膜的发育到黄体功能的维持,促性腺激素FSH和HMG的使用方案逐渐成熟,特别是近年来国内外普遍采用的GnRH-a的降调节处理,使大部分的促排卵周期都能获得理想的成熟卵子数,并防止早熟的隐匿性的LH峰出现。本文对大多数患者采用了GnRH-a短方案(flareup)进行促超排卵,它的优点是能够在卵泡募集阶段增加促性腺激素的水平,募集到较多的卵子数,节省FSH或HMG使用的药量,同时也能较好地抑制早熟的LH峰

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