ctgf反义rna对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

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1、CTGF反义RNA对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响【摘要】目的应用反义RNA技术特异性下调结缔组织生长因子(CTGF)的表达，观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响，并探讨其作用机制。方法培养原代VSMC，使用脂质体法将携带有CTGF反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CTGF(-)转染入VSMC，WesternBlot技术观察CTGF的表达以及蛋白激酶B(Akt)的活性，MTT法及划痕试验测定VSMC增殖和迁移情况。结果pcDNA3.1(+)-CTGF(-)转染VSMC后CTGF的表达明显降低，Akt的活性降低，VSMC的增殖和迁移受到明显抑制。

2、结论应用反义RNA技术可特异性下调CTGF表达，并通过降低Akt的活性抑制VSMC的增殖和迁移。【关键词】血管平滑肌细胞结缔组织生长因子细胞增殖细胞迁移反义RNAAbstract：ObjectiveTospecificallydown-regulatetheexpressionofCTGFbyapplyinganti-senseRNAtechniqueandobserveitseffectonproliferationandmigrationofVSMC.MethodsPrimaryVSMCswereculturedbyadherencemethod.Anti-sense

3、RNAtechniquewasappliedtospecificallydown-regulatetheexpressionofCTGF.ExpressionofCTGFandactivityofAktweredetectedbyWB.Proliferationandmigration12ofVSMCweredeterminedbyMTTandscratchassay.ResultsTransferofpcDNA3.1(+)-CTGF(-)couldspecificallydown-regulateCTGFexpressionandtheactivityofAkt.The

4、proliferationandmigrationofVSMCwereinhibited.ConclusionsSpecificdown-regulationofCTGFexpressionbyanti-senseRNAtechniquecouldinhibittheproliferationandmigrationofVSMCsbydecreasingthephosphorylationofAkt.Keywords：vascularSmoothmusclecell(VSMC);connectivetissuegrowthfactor(CTGF);cellprolifer

5、ation;cellmigration;anti-senseRNA动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)始于血管内膜损伤［1］。在AS发生前，常有多种因素的刺激对血管内膜造成损伤，内皮细胞发生功能性和器质性改变，造成通透性改变和分泌功能障碍，促进血液中的脂质进入动脉壁。内皮细胞和动脉中层的血管平滑肌细胞(vascularendothelialcell，VSMC)进一步激活，大量合成并分泌多种生长因子，使自身和周围细胞大量增殖，增殖的VSMC还可迅速合成胶原等细胞外基质［2］，促使VSMC在损伤修复过程中发生纤维化，形成瘢痕修复，血管壁在结构和功能上发生了变化

6、，最终导致了AS的形成［3］。12结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)是从培养的人脐带静脉血内皮细胞的条件培养基中发现的。有研究表明［4］，CTGF参与了血管的损伤修复，能够直接诱导结缔组织细胞增殖和细胞外基质合成，促进AS的发展。AS病灶中CTGF的mRNA和蛋白质较正常的血管内有较高表达，可见CTGF在AS的发生和发展中有着重要意义［5］。本课题旨在探讨CTGF在AS中对VSMC增殖和迁移的影响并明确其相关机制，为CTGF对动脉粥样硬化性血管狭窄病变过程的影响提供实验依据。1材料与方法1.1实验材料1月龄SD大鼠由辽宁

7、医学院实验动物中心提供。CTGF反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CTGF(-)质粒由辽宁医学院科学实验中心构建。羊抗大鼠CTGF多克隆抗体，ECLTM显影液，BCA-100蛋白质定量测定试剂盒(美国SantaCruz公司);Akt和磷酸化Akt抗体，平滑肌α肌动蛋白单克隆抗体(美国Sigma公司);低糖DMEM培养基(美国Gibco公司);小牛血清，胰蛋白酶(杭州四季青生物工程公司);其他试剂均为国产分析纯产品。12霍晓川，等：CTGF反义RNA对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响辽宁医学院学报2008年2月，29