吡罗昔康提高γδt细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究

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1、吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究作者：王婷，滕达，陈复兴，陶征中，吕小婷，李佚，张颂，刘军权【摘要】目的探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康(分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16mmol/L)诱导，24h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素12(IL-12)检测，沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果吡罗昔康浓度为0.04mmol/L时诱导的γδT细胞

2、穿孔素和粒酶B分别为78.7%和71.8%，明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达，并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24h后，培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌，并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04mmol/L时最高(75%)，明显高于对照组(58%)。结论经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。13【关键词】γδT细胞;吡罗昔康;穿

3、孔素;粒酶B;NKG2D;γ-干扰素;α-肿瘤坏死因子;白细胞介素12;胃癌　　Abstract:ObjectiveToexploretheeffectofpiroxicaminenhancingthecytotoxicityofhumanγδTcellstogastriccancercells.MethodsγδTcellswereroutinelyculturedandcollectedonthe9thday,followedbyinductionwithpiroxicamatdifferentconcentrations(0.01mmol·L-1,0.02mmol·L-1,0.04

4、mmol·L-1,0.08mmol·L-1and0.16mmol·L-1,respectively).24hlater,thesupernatantswerecollectedforthedetectionofIFN-γ,TNF-αandIL-12,andthesedimentsweredetectedfortheamountofperforin,granzymeBandNKG2Dbyflowcytometry(FCM)aswellasthecytotoxicityofγδTcellstogastriccancercellsbyLDH.ResultsTheexpressionlevels

5、ofperforinandgranzymeB(78.7%and71.8%,respectively)ofγδTcellswhichwereinducedbypiroxicamattheconcentrationof0.04mmol·L-1wassignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroup(51.4%and60.9%,respectively).TheexpressionofNKG2Dwasremarkablyinhibitedbypiroxicaminapositivecorrelationwiththeconcentrationsofdru

6、gs.TheamountsofIFN-γandIL-12secretedbyγδTcellsofpiroxicaminductionfor24hhadnosignificantdifferenceincontrastto13thecontrolgroup,however,thesecretionofTNF-αwasinhibitedinadosedependentmanner.ThecytotoxicityofγδTcellstothegastriccancercelllineBCG-823(75%)wassignificantlyhigherthanthecontrolgroup(58

7、%).ConclusionThecytotoxicityofpiroxicam-inducedγδTcellstogastriccancercelllineBCG-823wasmarkedlyenhanced,themechanismofwhichmightberelatedtothehigherlevelsofperforinandgranzymeBexpressedinγδTcells.　　Keywords：γδTcells;p