吡罗昔康提高γδt细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究

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1、吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究作者：王婷，滕达，陈复兴，陶征中，吕小婷，李佚，张颂，刘军权【摘要】目的探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康(分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16mmol/L)诱导，24h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素12(IL-12)检测，沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法

2、检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果吡罗昔康浓度为0.04mmol/L时诱导的γδT细胞穿孔素和粒酶B分别为78.7%和71.8%，明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达，并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24h后，培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌，并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04mmol/L时最高(75%)，明显

3、高于对照组(58%)。结论经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。【关键词】γδT细胞;吡罗昔康;穿孔素;粒酶B;NKG2D;γ-干扰素;α-肿瘤坏死因子;白细胞介素12;胃癌　　Abstract:ObjectiveToexploretheeffectofpiroxicaminenhancingthecytotoxicityofhumanγδTcellstogastriccancercells.MethodsγδTcellsatd

4、ifferentconcentrations(0.01mmol·L-1,0.02mmol·L-1,0.04mmol·L-1,0.08mmol·L-1and0.16mmol·L-1,respectively).24hlater,thesupernatantsentsountofperforin,granzymeBandNKG2Dbyfloetry(FCM)aseB(78.7%and71.8%,respectively)ofγδTcellsattheconcentrationof0.04mmol·L-1a

5、rkablyinhibitedbypiroxicaminapositivecorrelationountsofIFN-γandIL-12secretedbyγδTcellsofpiroxicaminductionfor24hhadnosignificantdifferenceincontrasttothecontrolgroup,hoanner.ThecytotoxicityofγδTcellstothegastriccancercelllineBCG-823(75%)-inducedγδTcells

6、togastriccancercelllineBCG-823arkedlyenhanced,themechanismofightberelatedtothehigherlevelsofperforinandgranzymeBexpressedinγδTcells.　　Key;perforin;granzymeB;NKG2D;IFN-γ;TNF-α;IL-12;gastriccancer　　胃癌是消化道最常见恶性肿瘤之一,在我国的发病率和死亡率居各种恶性肿瘤首位，超过2/3确诊胃癌的患者不可手术切除,即

7、使可行手术切除其复发率也很高[1]。因此，胃癌的预防和早期治疗尤为重要。流行病学调查发现，吡罗昔康和其他非甾体类抗炎药一样，长期服用能减少和预防消化道肿瘤的发生[2]，体外试验证明，吡罗昔康能提高人γδT细胞杀伤胃癌细胞的活性[3]。γδT细胞是广泛分布于消化系统、呼吸系统等黏膜和上皮组织内的固有免疫T细胞，具有抗原提呈、杀伤肿瘤和免疫调节作用[4-5]。为此，我们试用不同浓度的吡罗昔康在体外诱导人γδT细胞，观察吡罗昔康对人γδT细胞的穿孔素(perforin)、粒酶B(GranB)、NKG2D和分

8、泌γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素12(IL-12)3种细胞因子的影响，以探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用的机制。　　1材料和方法　　1.1材料人胃腺癌细胞株SGC-7901、BCG-823(上海细胞生物研究所)，胰蛋白酶、RPMI1640(Gibco公司)，人AB血清(徐州市血站)，胎牛血清和淋巴细胞分离液(中国科学院血液病研究所)，戊烯焦磷酸(isopentenylpgrophosphate，IPP)，吡罗昔