舒林酸提高γδt细胞杀伤胃癌细胞机制研究

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1、舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究作者：刘军权，陈复兴，巩新建，张宝福，张颂，吕小婷，陶征中，李佚，张娟【摘要】目的探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制。方法常规方法培养γδT细胞，收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸(1、2、4、8、16、32μmol/L)诱导24h，收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素12(IL-12)检测，沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株(SGC-7901和BCG-823)活性。每组测试样本

2、和指标均设未加药物诱导的对照组。结果舒林酸浓度在8μmol/L时，γδT细胞穿孔素和粒酶B达最高〔分别为(71.5±5.3)%和(78.3±7.1)%〕，明显高于对照组〔分别为(51.4±7.3)%和(60.9±7.1)%〕。γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL-12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8μmol/L时上清液中IFN-γ浓度达最高〔(246.1±20.7)ng/L〕，明显高于对照组〔(196.1±13.2)ng/L〕;当舒林酸浓度达32μmol/L时，γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组，两者比较有显著性差异(P<0.05)。γ

3、δT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8μmol/L时达到峰值，此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为(73.6±3.9)%和(76.3±3.9)%，与对照组〔(60.1±3.7)%和(59.2±4.5)%〕比较有明显差异(P<0.05)。结论舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关。【关键词】γδT细胞;舒林酸;穿孔素;粒酶B;NKG2D;细胞因子;胃癌　　Abstract:ObjectiveToexplorethemech

4、anismofsulindacontheeffectofhumanγδTcellsagainstgastriccancercells.MethodsRoutinecultureγδTcellsol/L,respectively).24hourlater,thesupernatantsentseBandNKG2Dbyfloetry(FCM)aseB〔(71.5±5.3)%and(78.3±7.1)%,respectively〕ofγδTcellsinducedbysulindacat8μmol/Lreachedthepeak,arkablyinhibitedbysuli

5、ndacandtheincreasedol/Lofsulindac.TheamountofTNF-αandIL-12secretedbyγδTcellsinducedbysulindachadnosignificantdifferenceincontrasttothecontrolgroup.ThecytotoxicityofγδTcellsinducedbysulindacat8μmol/LonthegastriccancercellsBCG-823andSGC-7901〔(73.6±3.9)%and(76.3±3.9)%,respectively〕entofthe

6、cytotoxicityofγδTcellsinducedbysulindacmightbeconnectedeBfromγδTcells.　　KeyeB;NKG2D;cytokines;gastriccancer　　许多研究认为，舒林酸(sulindac)不仅对家族性腺瘤性息肉病显示出独特的疗效，长期服用还能降低结肠腺癌的发生率、抑制早期癌症恶化[1]和显著抑制胃癌细胞生长。Yu等[2]研究发现，舒林酸对胃癌细胞株BCG-823有抑制作用，但是需要用900μmol/L以上的舒林酸才能诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞生长。而舒林酸的临床常规服用药物剂量为0.2g/8h，

7、根据换算，最高血药浓度仅为25.3μmol/L(舒林酸：T1/2为2.8h，生物利用度88%，口服0.2g/8h，达峰值时间tmax为1.86h，按一级动力学模型计算：ct=Co.e-ke，血药浓度为cmax=25.3μmol/L)，此实验用药剂量是临床实际使用量的30倍，该结果明显不符合临床的用药实际。也进一步说明，舒林酸能够预防消化道肿瘤不仅是化学直接预防，也可能是与体内的某些成分合成新的有效物质或者在体内促进抗肿瘤效应细胞功能有关。　　我们的前期研究发现，舒林酸能提高人γδT细胞杀伤肿瘤细胞活性[3]。而γδT细胞是广泛分布于消化系统、呼吸系统