大豆肽的离子交换色谱分离及其活性评价

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1、︸挤第22卷第5期OOD&MACHINERYVol.22，No.52006年9月Sep‘，2006大豆肤的离子交换色谱分离及其活性评价IsolationandidentificationofACEinhibitionpeptidesfromsoyhydrolyteswithionic-exchangechromatograph钟芳张晓梅麻建国ZHONGFangZHANGXiao-meiMAJian-guo(江南大学食品学院，江苏无锡214036)(SchoolofFoodScienceandTechnology,Sout

2、hernYangtzeUniversity,1Yuxi,Jiangsu214036,China)摘要:采用SephadexC-25阳离子交换剂对经过DA201-C型色谱已成为蛋白质分离纯化最常用的手段，统计显示，在蛋大孔吸附树脂脱盐、乙醇梯度洗脱(75%乙醇洗脱组分)的白质纯化方案中，使用到离子交换层析的占75%，其次是亲Alcalase水解大豆肤(DH14%)进行进一步的分离纯化，并对和层析和凝胶过滤层析[21。分离得到的各组分ACE抑制活性进行了评价。试管试验确SP-SephadexC-25是用于分离低分子量的蛋白质

3、、多肤定的SephadexC-25色谱分离条件为:上样量0.004g/mL1E,和核酸等，或是分子量极大的物质(MW>200000)。这主要起始缓冲液为1M醋酸，上样吸附率为61.19%。经SP_是由于离子交换剂本身带有强的功能基团磺丙基(SP一)，且SephadexC-25分离得到6个组分，其中未吸附的3个组分ACE抑制活性低，但NaCl梯度洗脱的3个组分ACE活性均颗粒较细，适合带电荷量不大且分子较小的物质的吸附，又为60%左右，从纯化ACE抑制活性肤的角度考虑，分离效果由于母体Sephadex具有分子筛效应，使它在

4、分离物质的同比SephadexG-15差。时，具有离子交换作用和分子筛效应。本实验选用SP-Seph-关键词:大豆蛋白;ACE抑制活性;分离纯化adexC-25对乙醇浓度为75%时从大孔吸附树脂洗脱下来具Abstract,SephadexC-25wasusedforfurtherfractionationofACEinhibi-有降血压作用的大豆肤进行分离纯化，同时，把分离的活性tionsoypeptidesobtainedfromAlcalasehydrolyzation(DH14%)and组分与经过SephadexG

5、-15凝胶过滤色谱分离的活性组分的gradientethanolelutionwithDA201-Cmacroporousadsorptionresin(75%ethanolfraction).FractionationparameterswithSphadexC-25wereACE抑制活性进行了比较，以确定最佳的纯化方案。decided协testtubeexperiment,theoptimalparameterswereasfollows;1材料与方法loadingcapacity0.004留mL1E,startin

6、gbuffer1Maceticacid,adsorp-1.1材料tionratio61.69%.SixfractionswereobtainedafterNaClgradientelu-tion,amongwhich3wereunabsorbedfractions.ACEinhibitionactivityof大豆分离蛋白:黑龙江省三江食品公司;the3NaClelutedfractionswereallabout60%，whichmeansthefraction-Alcalase碱性蛋白酶:丹麦NOVO公司;ation

7、effectofSphadexC-25wasnotasgoodasgelfiltrationchromato-DA201-C大孔吸附树脂:江苏苏青水处理工程集团有限graphSephadexG-15intermsofACEinhibitionpeptides公司;Keywords;Soyprotein;ACEinhibition;FractionationACE和HHL:美国Sigma公司;离子交换色谱(ion-exchangechromatograph)是发展最早HEPES:美国Sigma公司;的层析技术之一，它的原理

8、是因溶质分子带不同性质的电荷SP-SephadexC-25:瑞典Pharmacia公司;和不同电荷量，可在固定相和移动相之间发生可逆交换作其它化学试剂:均为分析纯实验设备。用，使溶质移动速度变化，从而达分离目的[’〕。1.2试验设备常用离子交换剂包括离子交换树脂、离子交换交联葡聚3L不锈钢酶反应器:自制;糖、离子交换