β甘露聚糖酶产生菌的分离、鉴定及产β甘露聚糖酶最适条件的研究

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1、万方数据·研究报告·生物技术通报B10TECHNOLOGYBULLETIN2009年第7期13I-甘露聚糖酶产生菌的分离、鉴定及产B-甘露聚糖酶最适条件的研究黄俊丽包凌霞王贵学(重庆大学生物工程学院,重庆400030)摘要:以采集的土壤样品为试验材料,经过富集培养及分离纯化,筛选出2株产13一甘露聚糖酶的菌株。采用摇瓶培养分别测定其酶活力,其中1株菌株酶活力较高,酶活力达50.36U/ml。生理生化性质鉴定及16SrDNA序列相似性结果表明该茵为假单孢茵(Pseudomonas叩.)。产酶的最适条件研究发现,ls/100ml玉米粉,2g/100ml

2、魔芋粉,pH6.0,320C为最优产酶条件,酶活力迭185.37U/ml,是优化前的3.68倍。该茼产酶迅速,培养12h后已达产酶高峰。粗酶的性质研究发现,该酶是一种酸性的甘露聚糖酶,作用的最适pH为4.0,最适反应温度为55℃;该酶的稳定性较好,在pH4.0—6.0、温度为40一55℃保持较好的稳定性。关键词:B-甘露聚糖酶假单孢茵分离鉴定酶活性StudiesoftheIsolationandIdentificationofStrain耐th13-mannanaseandItsEnzymologyPropertiesHuangJunliBaoLi

3、ngxiaWangGuixue(CollegeofBiologicalEngineering,ChongqingUniversity,Chongqing400030)Abstract:TwostrainswhichproducedB·mannanasewereisolatedfromsoilbyenrichingandisolating.Astrainwiththehigherenzymeactivityof50.37U/mlwasobtainedaftertheenzymeactivityassay.Thestrainwasidentifieda

4、sPseudomonas8p.bymorpho-logicalandphysiologicalcharacteristicsanalysisand16SrDNABLAST.TheoptimalconditionsforproducingB—mannanasebythestrainweredetermined1s/100mlmaizena,2g/100mlkonjakpowder,pH6.0andtheoptimaltemperaturewas32℃,underwhichtheactivityofB—mannanasewasupto185.37U/m

5、l,3.68timesasbefore.Thestrainwhichrapidlyproducedp-mannanaseshowedthehighestp·mannanaaeactivityafterculturingfor12h.Thestudyoftheenzymaticcharacterofthep-mannanaserevealedthatitW88theacidicB-mannanase,andtheoptimalconditionoftheenzymewaspH4.0and60℃,respectively.TheactivityofB—

6、mannanasewassta·bleatpH4.0—6.0and40—55℃.Keywords:B—mannanasePseudomonas8p.IsolationIdentificationActivityB一1,4一D-甘露聚糖酶(p一1,4一D—mannanase,EC3.2.1.78),简称B.甘露聚糖酶,是一类能水解含有B.1,4.D一甘露糖苷键的甘露聚糖,均一甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖等的半纤维素酶类。B一甘露聚糖酶广泛存在于自然界中,在动物、植物和微生物中均发现该酶的存在。但目前商业化生产或接近商业化生产的B一甘露聚搪酶来源

7、于微生物,尤其是细菌和真菌。微生物来源的B一甘露聚糖酶有着成本低、活性好、来源稳定、作用温度和pH范围广及容易提取等优点,因此微生物来源的B一甘露聚糖酶已成为国内外研究的重要方向。该酶用途广泛,能分解魔芋葡甘露聚糖,生产能促进双歧杆菌生长、改善肠道菌群结构的魔芋低聚糖;可作为工具酶用于天然多糖类结构的分析;在造纸工业中,与B一木聚糖酶等半纤维素降解酶类协同使用,能除去纸浆中的半纤维素,改善纸质;在纺织工业中用于纤维中半收稿日期:2008—12-26基金项目:重庆市科技计划项目(2007ACl060),重庆大学重点实验室对本科生开放创新基金作者简介:

8、黄俊丽(1974·),女.副教授,主要从事微生物分子学研究;E—mail:huaag_junli@126.corn,Tel

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