高效液相色谱法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷的含量

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1、高效液相色谱法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷的含量【关键词】注射用黄芩茎叶总黄酮野黄芩苷高效液相色谱法黄芩茎叶为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥地上部分,其有效部位为黄芩茎叶总黄酮（totalflavonoidsfromstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,SSF），其化学成分主要包括野黄芩苷、黄芩苷、芹菜素苷、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等黄酮类化合物。其中野黄芩苷具有清热解毒、扩张血管、改善体内微循环等明显药理活性［1］

2、。药理学研究发现黄芩茎叶总黄酮具有较强的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和较强的记忆改善作用［2～4］。为了有效地发挥黄芩茎叶的药用价值，方便急诊及不能口服药物的病人，我们将黄芩茎叶有效成分精制纯化，研制了注射用黄芩茎叶总黄酮。本实验通过建立HPLC法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量的方法来控制制剂的内在质量。　　1仪器与试药　　1.1仪器Shimadzu10ATvp高效液相色谱仪，CLASSvp5.0色谱数据工作站，瑞士产梅特AG-245型电子分析天平，惠普HP-8453紫外可见分光光度计，KQ-100E型超声波清洗器（昆山市

3、超声仪器有限公司）。　　1.2试药野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110842-200504），注射用黄芩茎叶总黄酮（承德医学院中药研究所研制）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为DiscoveryC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为以甲醇-0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱，0～30min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%甲酸溶液；流速0.8ml/min；检测波长335nm；柱温26℃；进样量10μl。　　2.2检测波长的选择将野黄芩苷对照品溶液进行光谱扫描，结果最大吸收波长为

4、335nm，故选择335nm为检测波长。　　2.3对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷减压干燥器中干燥24h的野黄芩苷对照品22.75mg至50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(0.455mg/ml)，备用。精密吸取上述溶液5ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；作为对照品溶液(0.2275mg/ml)。　　2.4供试品溶液的制备取黄芩茎叶总黄酮冻干粉10mg,精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放冷，补加甲醇至刻度，摇匀，放置，取上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，

5、取续滤液，作为供试品溶液。　　2.5空白试验按照样品制备工艺，制成不含黄芩茎叶总黄酮成分的空白冻干粉针，作为阴性对照，同法测定。结果空白冻干粉在与野黄芩苷对照品相同保留时间处无色谱峰，故认为无干扰。　　2.6线性关系考察精密吸取浓度为0.455mg/ml的野黄芩苷对照品储备液2，4，6，8，10μl依次注入色谱仪中，在前述色谱条件下，测定野黄芩苷的峰面积，结果见表1。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，见图1。回归处理得直线方程为Y=5×106X-351032，r=0.9999。表1线性关系测定结果（略

6、）x黄芩茎叶为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥地上部分,其有效部位为黄芩茎叶总黄酮（totalflavonoidsfromstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,SSF），其化学成分主要包括野黄芩苷、黄芩苷、芹菜素苷、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等黄酮类化合物。其中野黄芩苷具有清热解毒、扩张血管、改善体内微循环等明显药理活性［1］。药理学研究发现黄芩茎叶总黄酮具有较强的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和较强的记忆改善作用［2～4］。为

7、了有效地发挥黄芩茎叶的药用价值，方便急诊及不能口服药物的病人，我们将黄芩茎叶有效成分精制纯化，研制了注射用黄芩茎叶总黄酮。本实验通过建立HPLC法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量的方法来控制制剂的内在质量。　　1仪器与试药　　1.1仪器Shimadzu10ATvp高效液相色谱仪，CLASSvp5.0色谱数据工作站，瑞士产梅特AG-245型电子分析天平，惠普HP-8453紫外可见分光光度计，KQ-100E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。　　1.2试药野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110842-20050

8、4），注射用黄芩茎叶总黄酮（承德医学院中药研究所研制）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为DiscoveryC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为以甲醇-0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱，0～30min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶