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时间:2018-10-11
《内皮素与平滑肌肌动蛋白在视网膜增殖膜中的表达》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、内皮素与平滑肌肌动蛋白在视网膜增殖膜中的表达摘要:目的讨论内皮素(ET)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达.方法手术切取14例PVR患者的增生膜,以ET-1抗体和α-SMA抗体用免疫组织化学方法检测ET-1和α-SMA在增生膜的分布.结果ET-1分布于增生膜中的部分细胞质和核中,以及细胞外基质中,并在膜表面染色加深,膜边缘的细胞核呈深染的梭形和长条形.而α-SMA表达在膜的中央和边缘部,主要表达在细胞中,阳性细胞与膜的方向平行.结论ET和α-SMA在增生膜细胞中表达,增生膜细胞可能合成并分泌内皮素至细胞外基质中,作
2、用于α-SMA表达的细胞使其收缩. Keyoothmuscleactin;immunohistochemicalstainings Abstract:AIMTodiscusstheexpressionofendothelineandalphasmoothmuscleactininperiretinalmembraneofprolif-erativevitreoretinopathy(PVR).METHODS14periretinalmembranes(PCM)obtainedfrom14casesofPVRent(RD)undergoingvitretomy
3、inetheexpressionofendotheline-1(ET-1)andα-SMAbyimmunohistochemicaldetection.RESULTSThereac-tionsofET-1a-trix(ECM)inthevariousgradesofthePRMsanddarkenattherimofthePCM,ineofcytonucleusbecametheshapeoffusiformand/orslimerandlonger.AayexpressETandsecretittoECManddeliveref-fectsonthecontr
4、activecellsthatexpressα-SMA. 0引言 增生性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreo-retinopathy,PVR)是眼内过度修复过程,是视网膜脱离和手术失败的主要原因.内皮素(endotheline,ET)参与机体血管生理和细胞增殖活动的调节[1,2],促进修复细胞分泌细胞外基质和肌动蛋白并引起其收缩[3].而α-平滑肌肌动蛋白(alphasmoothmuscleactin,α-SMA)是细胞移行和具有收缩功能的基础.司艳芳等[4]的研究提示随着增生膜的发展α-SMA表达增强.但ET与α-SMA在PVR的增生膜
5、中相互作用却未见报道.本实验讨论ET和α-SMA在其收缩中的相互关系. 1材料和方法 1.1材料2000-07/2001-11本院眼科确诊为孔源性视网膜脱离(RRD)伴PVR患者14例,年龄4~63岁,病程2mo~2a.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法,分级为C3~D3.以上患眼行玻璃体切割术时取视网膜表面增生膜,其中下膜5例,前膜9例.以上组织用40gL-1多聚甲醛固定30min,4℃.经脱水、透明制成蜡块.最后制成5μm厚的切片,贴附于用多聚赖氨酸涂片的玻片上.ET-1鼠抗人mAb、鼠抗人α-SMAmAb、S-ABC即用型试剂盒、DAB
6、试剂盒(均为博士德公司提供). 1.2方法切片浸入7.5mLL-1H2O2-PBS,37℃30min,封闭内源性过氧化物酶;正常羊血清封闭消除非特异性染色;滴加α-SMA鼠抗人mAb(1200)和ET-1鼠抗人mAb(1200),湿盒4℃过夜,漂洗5min×3次;滴加生物素化兔抗小鼠IgG(1200),湿盒37℃孵育30min;滴加SABC复合物,37℃孵育30min;DAB显色,显微镜下观察,水洗中止反应;苏木素复染,脱水,透明,封片. 2结果 在14例不同级别的PRM中ET和α-SMA均有阳性表达,在6例PVR/C3级的PRM中,可见细胞成分较多,细胞
7、间质较少,细胞多为圆形,阳性细胞多(Fig1,3);在8例D级PRM中,细胞成分较少,细胞间质多,阳性细胞少(Fig2,4).各级增生膜均可见色素颗粒和团块.在PVR/C3膜中,两者均在膜的边缘浓染,胞体呈梭形,胞核呈圆形或卵圆形的阳性细胞.在细胞较多的区域,阳性细胞数目较多,染色较浅淡,胞体为长圆形,胞核呈圆形,在部分阳性细胞中可见色素存在;ET-1表达的较均匀,不但表达在细胞中,在细胞外基质中也有阳性染色;而α-SMA则主要表达在细胞中,在膜边缘呈节段分布(Fig1,3).在PVR/D膜中,α-SMA在膜的中央和边缘均见一些强阳性细胞,胞体呈狭长的梭形,与标
8、本的长径走行方向平行(F
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