细胞周期蛋白激酶抑制剂p16在翼状胬肉中的表达

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1、细胞周期蛋白激酶抑制剂P16在翼状胬肉中的表达【关键词】翼状胬肉；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂；增殖性细胞核抗原［Abstract］ObjectiveToobservetheexpressionofcyclinkinaseinhibitorP16inpterygiumandtoinvestigateitseffectsonthepathogenesisofpterygium.MethodsThenormalconjunctivatissuesandpterygiummunohistochemistry.ResultsTheexpressio

2、nratesofP16inconjunctivaandpterygium（P＜0.01）.TheexpressionsofPAinconjunctivaandpterygiummayplayanimportantroleonproliferationandpathogenesisofpterygium.［Key；cyclin-dependentkinaseinhibitor；PA翼状胬肉是眼科常见疾病，其发病机制至今尚不清楚，尤其是翼状胬肉中细胞增殖失控是否与细胞周期紊乱有关，目前已有研究［1］表明，这种紊乱是否与其依赖性激酶及正调控亚基（

3、cyclin）、负调控亚基（cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI）成员的表达失衡有关。本研究通过对翼状胬肉中细胞周期依赖性激酶抑制剂P16蛋白的检测，探讨翼状胬肉的发生及发展与细胞周期依赖性激酶抑制剂的关系。1资料与方法1.1一般资料2005年4月~2006年4月取协和医院手术室行翼状胬肉切除的成人患者11例及外伤行眼球摘除患者的正常结膜标本3例。1.2方法翼状胬肉头部立即用10％甲醛固定，常规逐级脱水，二甲苯透明，浸蜡后包埋，5μm连续切片。免疫组化染色：鼠抗人P16蛋白单克隆抗体来自北京中山生物技术公司

4、。石蜡切片常规脱蜡复水，0.3％过氧化氢室温孵育，抗原修复，正常山羊血清封闭，滴加适当比例稀释的一抗，4℃过夜，滴加生物素标记的二抗工作液，滴加辣根酶标记的链酶卵白素工作液，DAB显色。每批染色均设有阳性对照和阴性对照，其中阳性对照用已知阳性表达的乳腺癌标本，阴性对照用PBS缓冲液代替一抗。1.3P16表达检测在光镜下观察免疫组化染色切片，P16抗体染色阳性的细胞胞核呈棕黄色粗大颗粒反应，染色阴性细胞胞核则无棕黄色染色。1.4结果判定在400倍光镜下，每张切片随机计数500个细胞，计算其阳性率，阳性率＝（所计数的500个细胞中阳性细胞数/5

5、00）×100％。1.5统计学方法结果采用t检验进行统计学分析。2结果P16正常结膜组在上皮细胞全层均有表达，见图1，而翼状胬肉组P16仅在上皮层见极少数细胞微弱表达；翼状胬肉中P16表达率为（7.25±0.12）％，而正常结膜组织中P16表达率则为（88.47±0.73）％，两组经统计学分析，差异有显著统计学意义（t检验，P＜0.01）。PA在正常结膜组织及翼状胬肉中表达分别为（4.98±0.28）％和（24.59±0.64）％，P＜0.01。细胞周期中存在一些的控制，细胞周期的进展速度控制是由内特异性细胞周期依赖性激酶（cyclinde

6、pendentkinase，CDK）、细胞周期依赖性激酶细胞正调控亚基及其负调节亚基CDK抑制蛋白（CKI）共同完成的。已有较多的研究涉及肿瘤及增殖性疾病与细胞周期调控的关系［3］。宁宏等［4］通过检测家兔晶状体皮质吸除术后不同时间晶状体上皮细胞中的P27蛋白进行检测，发现随着术后时间的延长，P27阳性细胞数量显著增多。吴明星等［5］研究人类晶状体上皮细胞中CDK－E、CDK2、P21的表达，结果示在蛋白水平和转录水平都存在CDK－E、CDK2、P21的表达不平衡，从而推测术后晶状体后囊混浊（PCO）的发生可能是白内障术后特定的时限内存在C

7、DK和CKI表达的失衡，而启动细胞增殖的过程，引起后囊膜表面的细胞增殖移行并导致其混浊。由此可见，CKI与白内障的发生有着密切关系。本研究进一步表明CKI相关基因在翼状胬肉细胞中的失活，细胞周期紊乱，可能诱导其增殖失控，因此CKI相关基因在翼状胬肉细胞中的低表达及失活可能是翼状胬肉发生发展的重要原因。【参考文献】1王勇，张明昌.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂在翼状胬肉的表达研究.眼科新进展，2005，25（1）：52.2龙心光，王映芬，黄应桂,等.翼状胬肉中增殖细胞核抗原的免疫组化研究.中华眼科杂志，1999,35（5）:327.3Peste

8、llRG,AlbaneseC,ReutensAT,etal.Thecyclinsandcyclin-Dependentkinaseinhibitorsinhormonalregu