二烯丙基二硫化物对hl

《二烯丙基二硫化物对hl》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、二烯丙基二硫化物对HL作者：谢熠，范自力，姚晨姣，谭三勤，赵亚丽【摘要】为了研究二烯丙基二硫化物（diallyldisulfide，DADS）对白血病HL-60细胞株VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用，并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制，应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量；RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGFmRNA的相对含量。结果表明：HL-60细胞中均有VEGFmRNA的表达和VEGF蛋白的分泌；与空白对照相比，DADS3个浓

2、度组（0.625，1.25，2.5μg/ml）作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌（P<0.01）。3个浓度组间差异显著（P<0.01），其下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关（r>0.9，P<0.01）。结论：DADS可能通过抑制VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应。【关键词】二烯丙基二硫化物　　EffectofDiallylDisulfideonExpressionandSecr

3、etionofVEGFinHL-60LeukemicCells　　AbstractThestudyedtoinvestigatetheexpressionofVEGFmRNAandVEGFprotEininHL-60cellstreatedicmechanismofDADSinrespectofVEGFproduction.Semi-quantitativeRT-PCRandELISARNAandsecretionofVEGFprotEIninHL-60celllinestreatedbyDADSrespectively.The

4、resultsshoRNAandsecretionofVEGFproteinRNAandsecretionofVEGFproteininHL-60cellscouldbedoentLDADSfor48and72hoursandtheeffectshadadosedependentrelationship（r>0.9，P<0.01）.ThedifferencesbetongthreeDADS-treatedHL-60cellgroups（P<0.05）.ItisconcludedthatDADSeffective

5、lyinhibitstheproliferationofhumanleukemiacelllineHL-60cells;DADSexertsitsantileukemiceffectsbyreductionoftheexpressionofVEGFmRNAandVEGFproteinsecretion.　　Keyia;vascularendothelialgroa公司产品，相对分子质量为300.44，纯度≥98%。TRIZOL购自美国GibcoBRL公司；cDNA合成试剂盒、dNTP、TaqDNA聚合酶均购自晶美生物技术有限公司

6、，为美国Fermentas公司产品；电泳用琼脂糖为德国Promega公司产品；RULERTMDNA100bpladder产品购自晶美公司；VEGFELISA试剂盒购自晶美生物公司。VEGF引物由上海博亚生物工程服务有限公司合成，引物序列参见　　PCR产物琼脂糖凝胶电泳部分结果　　结果如图1、2所示，HL-60细胞表达VEGFmRNA的3种片段，即516bp、588bp和648bp，分别是3种异构体VEGF121、VEGF145、VEGF165mRNA的扩增产物，HL-60细胞以VEGF121的表达最强。在同一时间点上随作用药物浓

7、度的升高，VEGF条带与β-actin条带丰度比值下降。　　讨论　　VEGF可以刺激新生血管的产生，通过自分泌和旁分泌途径促进自身的增殖，VEGF可能作为一种旁分泌因子影响着白血病细胞自身的生物学效应［4］。大量的临床研究证明，VEGF在各类型的白血病细胞中均有高表达，且是影响白血病发生发展及预后的独立因素之一，寻找能抗VEGF产生的药物在白血病的治疗中就具有十分重要的意义。DADS是大蒜中一种有效的脂溶性成份，具有抑制白血病细胞生长、诱导白血病细胞分化、促进白血病细胞凋亡作用。为进一步探讨DADS抑制白血病细胞增殖的机制，我们

8、用ELISA法检测了不同浓度DADS作用48小时、72小时后白血病细胞培养液中VEGF的含量，用RT-PCR法检测VEGFmRNA相对量的变化，从而从蛋白及转录水平上探讨DADS对白血病细胞分泌VEGF及VEGFmRNA表达的影响。结果表明：经DADS处理过的H