hplcfld法测定丹参素在家兔组织中的分布

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1、HPLCFLD法测定丹参素在家兔组织中的分布【摘要】目的：建立高效液相色谱荧光检测（HPLCFLD）分析方法，测定丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中的含量.方法：家兔经丹参药材水提液灌胃后，其重要脏器的匀浆液以100mL/L高氯酸沉淀，上清液乙酸乙酯萃取.以4羟基苯甲酸为内标，测定丹参中丹参素在组织中的含量.结果：HPLCFLD法的检测限为0.01μg/mL，线性范围为0.05～200.00μg/mL；丹参中丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑组织中的含量顺序为c肾>c肝>c心>c肺&

2、gt;c脑>c脾.结论：建立的HPLCFLD检测法具有特异性强，灵敏度高和定量准确等特点，可为其他样品中丹参素的测定提供参考.【关键词】丹参素；高效液相色谱荧光检测法；组织分布　　【Abstract】AIM:Todetectionofdanshensulevelsinrabbittissues,oneofthebioactivepoundsinSalviamiltiorrhizaebyhighperformanceliquidchromatographyfluorescencedetectionmethod

3、(HPLCFLD).METHODS:TissuesamplesofrabbitsL/L)acidafteroraladministrationofSalviamiltiorrhizae.TheresultingsupernatantineditofthemethodL,andthelinearrangeL.ThecharacteristicprofileofDanshensuindifferenttissuesethodisspecific,sensitiveandaccurate,soitcouldbeusedf

4、oranalysisofDanshensuinotherbiologicalsamples.　　【Keyanceliquidchromatographyuleravioletdetection,HPLCUV）.然而，HPLCUV法与荧光检测法相比较，存在灵敏度低和特异性较差等缺点，虽然质谱法可用于生物样品中丹参素的分析，但由于该仪器设备比较昂贵而不易被利用和普及.本研究建立高效液相色谱荧光检测（highperformanceliquidchromatographyfluorescencedetection,H

5、PLCFLD）法，用HPLCUV和HPLCFLD两种方法测定家兔灌服丹参水提物后，其主要脏器组织中丹参素的含量，为丹参药材中丹参素在其他生物体液中的含量测定提供方法.　　1材料和方法　　1.1材料健康家兔12只，雌雄兼用，体质量1.8～2.5kg（动物合格证号：医动字08018，西安交通大学医学院实验动物中心）；1100型高效液相色谱仪（配有荧光检测器，紫外全波长扫描二极管阵列检测器，美国安捷伦公司）；BP221s型电子天平（德国赛多利斯公司）；TGL16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）；丹参药材（经陕西省药

6、品检定所鉴定，西安药材公司）.对照品：丹参素(批号110855200504，中国药品生物制品检定所)；4羟基苯甲酸（化学纯，批号920728，北京化工厂）.甲醇(色谱纯，美国费希尔公司)；高氯酸、乙酸乙酯、甲酸（均为分析纯，天津化学试剂二厂）.　　1.2方法　　1.2.1丹参药材供试品溶液的制备取丹参药材粉碎干燥至恒重.精密称取丹参150g，以8倍量水浸泡30min，加热回流提取2次，每次1.5h，合并提取液，抽滤，滤液减压浓缩至75mL，4℃冷藏备用.　　1.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参素对照品5.0mg，

7、用甲醇定容于10mL容量瓶中，制备成0.50mg/mL的丹参素对照品溶液.同法制备0.91mg/mL的4羟基苯甲酸供试品溶液（内标溶液）.　　1.2.3含药组织供试品溶液的制备随机抽取健康家兔6只，按10g/kg丹参生药量灌胃，于给药后50min处死，迅速摘取心、肝、脾、肺、肾、脑，液氮冷冻.解冻后，分别精密称取脾0.8g，心2.0g，肝、肺、肾和脑均为4.0g，于脾中加入1.2mL生理盐水，于心中加入3.0mL生理盐水，于肝、肺、肾和脑中各加入6.0mL生理盐水，冰浴下匀浆.匀浆液于2146.56g离心10min，

8、取上清液，以0.5mL匀浆液加50.0μL浓度为100mL/L高氯酸沉淀蛋白，于2146.56g离心10min，取上清液，上清液用2倍量（V∶V）乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，氮气吹干，残渣用0.5mL流动相溶解，0.45μm微孔有机系膜滤过，4℃冷藏备用.　　1.2.4色谱条件色谱柱：安捷伦ZORBAXSBC18液相色谱柱