《h1n1siv（猪流感病毒）ha蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断siv的夹心elisa.

《《h1n1siv（猪流感病毒）ha蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断siv的夹心elisa.》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、H1N1SIV（猪流感病毒）HA蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断S1V的夹心ELISA方法的建立摘要：猪是流感病毒传播的中间宿主，猪感染猪流感病毒（SIV）后会导致其他疾病如蓝耳病、圆环病毒病、胸膜肺炎等疾病的发生，给畜牧业造成巨大的经济损失，对人类健康造成了严重威胁。快速诊断和及时监测是控制流感的首要步骤。H1N1亚型猪流感病毒（SIV）的血凝素（HA）基因在流感病毒传染的过程中与识别靶细胞表面受体在穿膜过程中起重要作用，刺激机体产生的中和抗体可以抵抗病毒感染。本论文采用RT-PCR方法扩増了H1N1亚型猪流感病毒（SIV）广东株的

2、血凝素（HA）基因，测序后对HA基因进行生物信息学分析，分析结果表明HA蛋白具有良好的免疫原性，可以作为诊断试剂。然后将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上，成功构建重组表达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表达，SDS-PAGE可检测到分子量约为94.0ku的融合蛋白，通过薄层凝胶扫描分析表明表达产物占菌体总蛋白的29.5%。经蛋白可溶性分析看出，融合蛋白90%以上是以可溶形式表达的。Western-blot证实，可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的免疫反应性。纯化表达的HA融合蛋白

3、作包被抗原用于猪流感病毒单克隆抗体的筛选，筛选到2株猪流感病毒针对HA蛋白表位的单克隆抗体，•用制备的SIV单克隆抗体，建立了高特异性的检测H1N1亚型SIV的间接ELISA方法，为猪流感的防控奠定基础。关键词：H1N1亚型猪流感病毒血凝素（HA）生物信息学高效可溶表达单克隆抗体ELISA方法BiologicalinformationanalysisandhighsolubleexpressionofHAproteinofH1N1subtypeSwineInfluenzaVirusalongwithestablishmentofanELISAas

4、saytodiagnoseSIVAuthor:Xie¥i-hcngrLiDong,SuPci-suirChenChen-guorZhouKe,HuangHui-xiongDirectorteacher:XieQing-mciassociateprofessorCollegeofAnimalScience,SouthChinaAgric.Univ.,Guangzhou510642,ChinaAbstract:Swineisanintermediateofspreadinginfluenzavirus,swinesinfectedinfluenzav

5、iruswillbringonotherdiseasessuchasPRRS,PCV，APP.causingeconomiclosesinthestockbreedingandintimidatingthehealthofhumansothatfastdiagnosisandtimelyanalysisarethefirststeptocontroltheinfluenzavirus.TheHAgeneofH1N1subtypeinfluenzavirusisolatedfromGuangdongProvincewassuccessfullyam

6、plifiedbyRT-PCR，thenanalyzedbiologicalinformationaftertranslatingDNAsuquences>AndtheHAfragmentwasinsertedintoplasmidpBCXtoobtainrecombinantplasimdinwhichHAgenewasfusedinto.ThepMBX-HAwastransformdintoE.coliBL-21(DE3)toinduceHAgenefusionexpression.Thefusionproteinbandwithrelati

7、vemolecularmassof94000wasdetectedontheSDS-PAGEgel，andthesolubleexpressionproductsaccountedfor29.5%ofthetotalE.coliproteins.Thesolubleformoftheexpressionproductswasupto90%thefusionprotein.Fromwestern-blotanalysisofrecombinantproteinHA,theexpressionfusionproteinandpositiveblood

8、serumofH1N1SIVhavefavorableimiminogenicity.ExpressedproteinHAisusedf