毛竹myb基因胁迫诱导型启动子的结构与功能分析

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1、分类号S7密级公开UDC630全日制硕士专业学位研究生学位论文毛竹MYB基因胁迫诱导型启动子的结构与功能分析作者姓名：王蕾指导教师：张智俊副教授专业学位名称：农业推广硕士领域名称：林业研究方向：森林培育所在学院：林业与生物技术学院论文提交日期：2017年2月28日浙江农林大学2017年2月28日ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterStructureandFunctionalAnalysisofInduciblePromoterofthePhyllosta

2、chysedulisMYBgeneCandidate:WANGLeiAdviser:ZHANGZhi-junAssociateprofessorSpecialty:ForestryDateofSubmission:February28,2017ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaFebruary,2017摘要毛竹（Phyllostachysedulis）是我国分布最广，种植面积最大，资源最多，开发利用最高的优良竹类植物。毛竹适合在湿润、高温、微酸性或中

3、性土壤的地区生长。低温、干旱、黑暗等逆境会对毛竹的生长发育产生严重的影响，因此研究毛竹的抗逆机制具有重要意义。本文基于本实验室对毛竹抗逆基因PeMYB的研究，采用PCR扩增的方法对毛竹PeMYB启动子进行克隆，并进行生物信息学分析，以及该启动子全长的活性验证和5’端缺失的功能分析研究。研究结果如下：1.采用PCR扩增的方法对毛竹PeMYB基因的启动子进行克隆，获得长度为1332bp的毛竹PeMYB基因的启动子序列PeMYBpro，基因编号为PH01000142。2.运用PLANTCARE软件对PeMYBpro启动子序列进行

4、生物信息学分析；结果显示PeMYBpro启动子序列中不仅包含MYB的核心元件；也含有大量与光、低温、干旱、脱落酸、茉莉酸、水杨酸、赤霉素等非生物胁迫有关的响应元件。3.通过构建pCAMBIA1301-PeMYBpro启动子全长植物表达载体分析PeMYBpro启动子活性；在洋葱表皮中进行pCAMBIA1301-PeMYBpro的瞬时表达分析；GUS基因的活性染色表明PeMYBpro启动子具有诱导型启动子活性，且在低温、干旱、黑暗胁迫诱导下有较强的活性。4.成功构建pCAMBIA1301-PMpro-P1、pCAMBIA130

5、1-PMpro-P2、pCAMBIA1301-PMpro-P3、pCAMBIA1301-PMpro-P4四个5’缺失植物表达载体；瞬时表达分析后，分别对GUS基因进行活性染色分析和定量分析。结果显示：这4个片段都具有诱导型启动子得活性，启动子PeMYBpro在-1332~-1033bp之间并无与干旱、低温、黑暗三类胁迫密切相关的启动子元件；在-1032~-740bp之间存在大量与干旱胁迫有关的响应元件；在-450~-141bp之间存在能够响应低温胁迫的元件；在-1032~-740bp和-449~-141bp之间存在大量与光

6、响应相关的启动子元件。关键词：毛竹，PeMYBpro启动子，克隆，功能分析，瞬时表达IAbstractPhyllostachysedulisisabundantbambooresourceswiththemostwidelydistributed,thelargestplantingareaandexploitationandutilizationofthehighestvalueinchina.Phyllostachysedulisusuallygrowsindamp,hightemperature,acidicorne

7、utralsoilregion.Lowtemperature,droughtanddarkstresscanseriouslyaffectthephyllostachysedulisnormalgrowth.Therefore,thestudyonitsstressresistancemechanismisimportantsignificance.ThispaperstudiesonresistancegenePeMTBofphyllostachysedulis,adoptingPCRamplificationtoclo

8、neMYBpromoterofphyllostachysedulisandbioinformaticsanalysis,aswellasthepromoteractivityoftotallengthofverificationandlackof5’endoffunctionalanalysis.The