正交试验优选—大孔树脂分离连翘酯苷的工艺

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1、正交试验优选—大孔树脂分离连翘酯苷的工艺【关键词】连翘；提取工艺；正交试验Extractiontechnologyofforsythiasidefromfructusforsythiaebythemethodoforthogonaltestoptimizationandseparationthroughmacroporousresin【Abstract】ObjectiveTodesigntheextractionandseparationtechnologcialconditionsofforsythiasidefromFructusForsythiae.MethodsT

2、hesolventofextractionethodnofalcohol,thetimeandthetimesofextractionandtheprocessofabsorptionseparationthroughmacroporousresincolumnontheyieldingrateofforsythiasidefromFructusForsythiae.ResultsTheoptimumextractionconditioneseesthevolumeofthealcohol.TheeluentFructusForsythiae9.1%to10.6%byth

3、istechnology.Theconcontrationofforsythiasideinextract18%to22%,sothistechnologyissuitableforindustrialproduction.【Keywords】fructusforsythiae;extractingprocess;orthogonaltest连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)vahl的干燥果实。连翘中所含成分主要为连翘酯苷(forsythiaside)［1,2］、连翘苷(phillyrin)［3］、挥发油［4］、黄酮类等。其中，含量较高

4、且药理活性较强的成分是连翘酯苷，其对金黄色葡萄球菌等11种细菌有极强的抑制作用，是连翘抗菌、抗病毒的主要有效成分之一［5］。故本文以连翘酯苷含量为指标，考察了提取溶媒。确定提取溶媒后，采用正交试验进行提取工艺优化，提取物进一步用大孔树脂分离纯化，从而系统的研究了连翘提取和分离纯化工艺。1仪器与试药Waters高效液相色谱仪（616泵，996二极管阵列检测器；717自动进样器，2010色谱管理系统）；甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；水（重蒸馏水，自制）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；连翘酯苷对照品（沈阳药科大学徐绥绪教授提供）。2方法与结果2.1提取溶

5、剂的选择连翘中含量最高抗菌活性最大的成分为连翘酯苷，其结构中含双糖基和咖啡酰基，极性较大，在水和含水乙醇中溶解性极好。因此分别选择以水为溶媒的煎煮法和以70%乙醇为溶媒的回流提取法，比较二者优劣，含量测定结果见表1表1不同溶剂提取的结果结果表明：70%乙醇对连翘酯苷的提取率较水高，故选择醇提取法。2.2醇提取工艺优化的研究采用正交试验法对乙醇提取工艺中的加醇量、回流时间、回流次数、醇浓度进行考察，方法与结果如下。2.2.1正交设计表见表2。表2L9（34）因素水平表2.2.2正交试验及结果见表3。表3正交试验结果2.2.3方差分析表见表4。表4方差分析表注：F0.05(2

6、.2)=19，F0.01(2.2)=992.2.4结果由正交试验结果可知，回流次数和醇浓度对收率和连翘酯苷含量有极显著影响，回流时间对其有显著影响，而加醇量对结果影响很小，将其并入误差相。影响因素的显著性大小依次为C>D>B>A。最佳提取工艺为A2B2C3D2，即：加7倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1.5h。2.3大孔吸附树脂的选择最佳提取工艺获得的提取物，上样于大孔树脂柱上。试用了A型、B型、C型3种大孔吸附树脂，上样后以水洗至洗脱液无色，蒸干后固型物用聚酰胺薄膜层析检测，A型树脂吸附能力过强，B型稍有泄漏，C型泄漏严重，故选择A、B型混合使用，通

7、过试验确定二者最佳比例。试验结果见表5。表5大孔树脂选择结果结果表明：树脂A型和树脂B型用量比为1：1时最适宜。大孔树脂洗脱物的收率为9.1%～10.6%（以药材计），连翘酯苷的含量为18.3%～22.5%。2.4.2样品溶液的配制取连翘提取物5～30mg，精密称量，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，混匀后取适量离心，上清液供HPLC法用。2.4.3色谱条件色谱柱：NovapakC18柱（3.9mm×150mm）；流动相：甲醇-水-磷酸（40：60：0.1）；流速：0.8ml/min；检测波长：328nm；柱温：室