hla测序技术在非亲缘性脐血移植应用价值探讨论文

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1、HLA测序技术在非亲缘性脐血移植应用价值探讨论文廖灿，杨昕，李焱，黄以宁，许遵鹏，吴洁莹，汤雪薇，陈劲松.freelers）低分辨结果进行了比较分析。结果发现，HLA不合位点不多于2个和HLA不合位点不少于3个的病例GVHD的发生率具有统计学显著性差异（P0.05）。在对HLA-A、B、DRB1等位基因高分辨单因素分型结果中，HLA-B和HLA-DRB1等位基因匹配全相合的病例GVHD发生率显著低于不完全相合病例GVHD的发生率（P=0.000，P=0.005）。结论：PCR-SBT技术在非亲缘性

2、脐血移植HLA配型方面具有重要的临床应用价值。【关键词】非亲缘性脐血移植；HLA配型;HLA测序技术；HLA-SBT；脐血ClinicalApplicationofHLASequencinginUnrelatedUmbilicalCordBloodTransplantationAbstractFromJune1998toJuly2004,Guangzhouumbilicalcordbloodbankprovidedunrelatedumbilicalcordbloodfor54patientsto

3、morethan21transplantationcenters.HLAsequencing-basedtyping(SBT)ationabout48outof54patientsonthsoffollobilicalcordbloodunits,andtheobtainedresultsismatchedHLAsitesandlessthan3sitessinglefactoranalysisandhigh-resolutiontypingofHLA-A,BandDRB1alleles,them

4、ismatchbetportantroleinumbilicalcordbloodtransplantation,andtheincidenceofGVHDishigherinthetransplantationismatching.Keybilicalcordbloodtransplantation;HLAmismatch;HLAsequencing;HLAsequencingbasedtyping;umbilicalcordbloodHLA高分辨分型技术不仅可以对HLA血清学配型起到积极的校正

5、作用，对研究哪些HLA等位基因相合可以明显减弱GVHD，哪些等位基因不相合可以耐受等方面以及制定相对个体化的HLA配型策略都具有重要的临床应用价值。在骨髓造血干细胞移植中，HLA测序分型技术得到了广泛的应用和发展，在预防GVHD方面具有十分重要的意义。本研究采用以测序为基础的HLA分型技术（HLA-sequencingbasedtypingHLA-SBT）对可随访的48例非亲缘性脐血移植病例HLA配型结果进行回顾性分析，以探讨HLA-A/B/DRB1等位基因匹配程度对非亲缘性脐血移植GVHD的影响

6、。材料和方法脐血来源脐血样本全部来自广州脐血库，脐血分离、冷冻、保存以及相关检测参考相关文献［2］。移植供受体选择54例非亲缘性脐血移植供受者样本及随访资料由国内21家移植中心提供，其中6例待随访，选择48例非亲缘性脐血移植病例进行回顾性分析，移植受者一般情况见表1。Table1.Generalcharacteristicsof48UCBTrecipients（略）急性移植抗宿主病（aGVHD）的预防48例移植病人均采用环孢霉素+甲基强的松龙方案预防aGVHD。移植供/受体的DNA提取移植供/受体

7、DNA提取均采用GTDNA提取试剂盒。HLA-SSP分型采用OneLambda公司的HLA-SSP分型试剂盒、PE9700PCR仪进行分型，采用OneLambda公司提供的HLA分型格局表判读结果。HLA-SBT分型应用ABIPRISM3100型测序仪进行分型。DNA4μl与PCRMix（Forensic公司提供）16μl混合，再加入金牌酶0.3μl进行扩增反应。PCR条件如下：95℃10分钟；96℃20秒，60℃30秒，72℃3分钟，36个循环；4℃forever。取PCR产物5μl在2%琼脂糖

8、凝胶中电泳，确定是否扩增。向PCR产物中加入3μlExoSAP-IT,进行消化反应：37℃20分钟，80℃15分钟。消化后产物与SequencingMix混合后，进行测序反应：96℃20秒，60℃2分钟，共25个循环。测序反应产物用NaOAc/EDTA去除多余的SequencingMix，并用100%及80%EtOH沉淀和纯化DNA。加入15μl甲酰胺，置于ABTPrism3100测序仪中进行电泳。利用MatchTools及MTNavigator软件对电泳结果进行分析，得出HLA高