白眉蝮蛇蛇毒中l论文

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1、白眉蝮蛇蛇毒中L论文魏晓龙，魏继福，黄阗，陈秋玉，刘岳宁，何韶衡【关键词】LAcutelunginjuryinducedbyLaminoacidoxidasepurifiedfromAgkistrodonblomhoffiiussurensisvenom【Abstract】AIM:TopurifytheLaminoacidoxidasefromAgkistrodonblomhoffiiussurensisvenomandstudyitseffectonlung.METHODS:AnLaminoacidoxid

2、asethesnakevenomofAgkistrodonblomhoffiiussurensis(ABULAO)byusingabinationofHeparinSepharoseFFcolumnandQSepharoseHPcolumn.TheBALB/cmiceice)atoxylineosinforlightmicroscopicobservation.Themeannumbersofredbloodcells(RBCs),intraalveolarpolymorphonuclearleucocyte

3、s(IAPLs),alveolarseptapolymorphonuclearleucocytes(ASPLs)inahighpoeanalveolarcavityarea(MACA)agesoftogeneity.Themoleculareis60kDinedbySDSpolyacrylamidegelelectrophoresis.ThecalculationsofRBCs,IAPLs,ASPLsandMACAinmicetreatedatographicprocess.Theenzymecaninduc

4、eseriousacutelunginjuryice.【Keyinoacidoxidase;Agkistrodonblomhoffiiussurensis;Acutedisease;lung/injuries;mice,inbredBALBC【摘要】目的：从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响.方法：通过HeparinSepharoseFF及QSepharoseHP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L氨基酸氧化酶，命名为ABULAO.给Balb/c小鼠静脉注射50，5.freelacia公

5、司；各种氨基酸底物，Odianisidine等购自Sigma公司；分子量标记物、电泳系统和电泳用试剂均购于BioRad公司.CoomassiePlusTMProteinAssay试剂盒购自Pierce公司.其他试剂都是分析纯.1.2方法1.2.1酶的分离纯化①样品处理：取白眉蝮蛇蛇毒200mg，溶解于5mLA液（25mmol/LTrisHCl缓冲液，pH8.5）中，在4℃条件下，10000r/min离心10min，取上清上柱.②肝素凝胶亲和层析：整个纯化过程用?KTAPrimer自动纯化仪，肝素凝胶填料为He

6、parinSepharoseFastFloL，流动相B液为含有1mol/LNaCl的A液.用A液充分平衡到电导值稳定时，上蛇毒上清.程序为：A液50mL后，以0%B~100%B线性梯度洗脱250mL，再用100%B洗柱50mL.流速为2mL/min，每管收集3mL.③阴离子交换层析：Q凝胶填料为QSepharoseHighPerformace，色谱柱体积为75mL.用A液充分平衡到电导值稳定时，上肝素亲和层析下的穿过峰.程序为：A液100mL后，以0%B~100%B线性梯度洗脱500mL，再用100%B洗柱1

7、00mL.流速为2mL/min，每管收集4mL.蛋白质含量用在280nm的光吸收值变化表示.1.2.2酶活性测定酶活性参照Ponnudurai等［3］的方法，并稍加修改，以L亮氨酸为底物，通过436nm处光吸收值变化测定释放的过氧化氢量来计算酶活性.在25℃条件下，每分钟消耗1μmolL亮氨酸底物所需的酶量定义为一个酶活性单位.反应体系如下：0.1mol/LTrisHCl缓冲液（pH8.5），含有20μmol/LL亮氨酸，10μmol/LOdianisidine，辣根过氧化物酶(0.08335nkat/L)和

8、L氨基酸氧化酶，总体积为100μL.反应在酶标仪（SPECTRAMAX340PC(MolecularDeviceCorp)）中进行，反应速度用反应体系在436nm处A值的改变来测定.摩尔消光系数8.31×103mol/（molcm）.1.2.3蛋白质定量蛋白质浓度用CoomassiePlusTMProteinAssay试剂盒测定.1.2.4SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳，电泳分离胶的浓度(以体