pma联合钙离子载体诱导k562细胞向树突状细胞分化

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1、PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化【摘要】目的探讨卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）联合钙离子载体（CI）诱导K562细胞向树突状细胞（DC）分化的作用。方法对数生长期的K562细胞在含PMA和CI的培养液中培养96h后，倒置相差显微镜下观察细胞形态，用流式细胞仪检测细胞表型，用MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖的能力。结果PMA联合CI组细胞形态发生明显变化，表面出现许多细小的突起，细胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLADR和CD1a表达上调，并且可以刺激淋巴细胞的增殖反应。结论PMA联合CI可以有效地使K562细胞向DC分

2、化。【关键词】K562细胞树突细胞十四酰佛波乙酯钙通道离子载体ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofPMA(phorbolmyristateacetate)andcalciumionophore(CI)ininducingthedifferentiationofleukemiacelllineK562intoactivateddendriticcells(DC).MethodsK562cellsonmediumcontainingCI(A23187)andPMAfor96h.Thecellmorphologyicro

3、scopeandtheelectronicmicroscope.TheviabilityrateofK562cellsculturedineachgroupinedbythetrypanbluestaining.Theimmunologicphenotypesetry.Theproliferationreactionoflymphocytecellsetry.ResultsAfter96htreatmentl)andPMA(10μg/mL),thecellsexhibitedthecharacteristicDCmorphology,CD83,CD86,

4、CD80,CD40andHLADR,CD1aexpressionulatetheproliferationofallogenEicTcells.ConclusionCIinbinationchannels;ionophores福建医科大学学报2008年7月第42卷第4期曾晓明等：PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化树突状细胞（DC）是体内最强的抗原提呈细胞（APC），来源于髓系祖细胞。在白血病的细胞中，DC的祖细胞和白血病细胞同样来源于骨髓造血干细胞，因此可以刺激原始细胞分化成DC，直接呈递完整的白血病抗原，从而刺激T细胞产生抗肿瘤效应

5、[1]。笔者观察了卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbolmyristateacetate，PMA)联合钙离子载体（calciumionorphore，CI）诱导K562细胞向DC分化的作用,探讨运用细胞株进行抗白血病免疫治疗的可行性。　　1材料与方法　　1.1材料　　K562细胞株由福建医科大学药理学研究所馈赠。CI（A23187）、PMA为Sigma公司产品。RPMI1640干粉为美国Gibco公司产品。胎牛血清(FCS)为杭州四季青生物制品公司产品。异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗HLADR、CD80单抗，PE标记的抗CD86，CD83，CD40和

6、CD1a单抗及同亚型对照抗体（鼠抗人），均为美国eBioscience公司产品。丝裂霉素C为上海Roche公司产品。6孔培养板、96孔培养板均为Coasta公司产品。L谷氨酰胺、MTT及台盼蓝制剂为厦门泰京生物工程有限公司产品，人淋巴细胞分离液为天津市灏洋生物制品科技有限责任公司产品。　　1.2方法　　1.2.1K562细胞培养及形态观察　　（1）取对数生长期的K562细胞，以完全RPMI1640培养基（加入10％FCS，10mmol/LL谷氨酰胺）悬浮，以1×106mL-1接种于6孔板中，每孔2mL，分4组。PMA+CI组：加入PMA和CI,使PM

7、A最终浓度为10ng/mL，CI最终浓度为375ng/mL；PMA组：只加入PMA，PMA最终浓度为10ng/mL；CI组：只加入CI，CI最终浓度为375ng/mL；对照组：只加培养基。每组细胞为一板（n=6），37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养，隔天半液换量。实验组（包括PMA+CI组、PMA组及CI组）另外加入半量新鲜试剂，对照组只补充新鲜培养基。培养96h后收获细胞。（2）形态观察。收获4组细胞，在倒置显微镜下观察细胞形态。（3）细胞活率测定。收获各实验组的K562细胞，按台盼蓝1滴、K562细胞9滴的比例混合均匀，<30s滴于

8、细胞计数板上，显微镜下计数。计算细胞活率=不染色细胞/（染色细胞＋不染色细胞）×