白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的研究

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1、浙江大学硕士学位论文白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的研究姓名：童向民申请学位级别：硕士专业：内科学（血液病）指导教师：金洁2003.4.1浙江大学硕士学位论文白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的研究浙江大掌医掌院内科掌(血液病)2000扳硕士研究生童向民导师金洁教授摘要树突状细胞(Dendriticcell，DC)是目前功能最强，也是唯一可直接活化初始型T细胞的抗原递呈细胞(APC)。白血病细胞来源的树突状细胞，既携带肿瘤抗原，而且又是功能强大的APC，能激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，发挥自体抗白血病效应，为白血病的免疫治疗开辟新的途径。本实验研究白血病细胞来源的

2、树突状细胞形态、免疫标记、功能以及分泌IL．12的能力。以24例急性髓细胞白血病(AML)和13例慢性粒细胞自血病(CML)的骨髓单个核细胞为研究对象，并以5例健康献血员的外周血单个核细胞作为正常细胞，诱导扩增DC。比较白血病来源的DC与正常细胞来源的DC在形态、免疫标记的表达和抗原递呈功能方面的差别。厂单个核细胞在细胞因子rhGM．csFloong／ml、rhIL．450ng／ml和TNF—a10rig＼∑。／ml的存在下，培养10—14天作为实验组；不加细胞因子培养相同时间作为对照组。用普通光学显微镜、倒置显微镜、透射屯镜观察到实验组的AML、CML细胞和正常单个

3、核细胞在诱导分化过程中均可以聚集成簇，形成集落，边缘的细胞有毛刺状突出，最后可形成具有典型形态的DC。5例正常单个核细胞培养过程中均可以见到DC的典型形态；而24例AML细胞，19例见到DC的形态变化；l3例CML浙江大学硕士学位论文细胞11例见到典型的DC形态。对照组细胞生长缓慢，白血病细胞和正常细胞均没有出现DC的形态变化。以流式细胞仪检测AML来源的DC免疫标记CD80、CD86、CD83、CDl。、均较对照组明显提高，CD80(6769±2437)％VS(1959±I587)*／,cr=7．012，P=OO001)CD86(70．09±2392)％VS(253

4、4±1504)％(T=6703，P=O0001)；CD83(6582±25．06)％VS(2073±1547)％(T=6441P=O．0001)；CDI。(6265±25．45)％VS(2521±2116)％(T=4．853，P=O．0001)。I-ILA-DR有上升趋势，(71．77±I809)％VS(5432±3893)％，但无统计学差异(T=I440，P=O17)。CML来源的树突状细胞的免疫标记CD80、CD86’CD。3、CDl．，HLA—DR较对照组均明显提高。CD80(57．48±2769)％VS(1883±1987)％(T；3812，P=O．001)；

5、CD。6(6173±2854)％VS(2449±2587)％(T=3．267，P=O．0037)：CD83(51．92±3412)％VS(1761±1676)％(T=3077，P=00071)；CDI．(4726±3560)％VS(1041±952)％(T；3482P200038)；HLA·DR(6418±29．43)％VS(1253±1169)％(T=4568，P=O0012)。而AML-DC与CML-DC相互之间无差异(P>O05)。同样，正常细胞来源的树突状细胞的免疫标记CD80、CD86，CDs3，CDl．、I-ILA·DR均较对照组明显提高。CD80(604

6、5±1404)％VS(303±186)％(T=8105，P=O0036)；CD。6(8475±1609)％VS(890±849)％(T=8337，P=OO002)；CD83(7063±1272)％VS(738±560)％(T=9057，P=00003)；CDl．(68．85±1231)％VS(875±5．83)％(T=8818P=00001)：HLA-DR(7957±1964)％VS(8．64±6．39)％(T=6867，P=O0005)。AML—DC、CML．DC与正常细胞来源的I)C免疫标记相比也无说明白血病来源的DC与正常人的DC免疫标记的表达相似。差异(P>O

7、05)以荧光原位杂交法(FISH)检测1例AML．M3的PML．RARd融合基因，对照2浙江大学硕士学位论文组阳性率为80％，具有DC典型形态的实验组阳性率为83％。1例CML的BCR．ABL融合基因，对照组阳性率为75％，具有DC典型形态的实验组为70％。结合免疫标记的检测，可证实这类DC是由白血病克隆的细胞分化而来。白细胞介素12(IL．12)具有重要的免疫调节功能，可通过诱导IL．12R的B2链上调，促进Thl细胞的分化，并可诱导CTL细胞的产生，增强NK细胞活性。成熟的DC可以自分泌的形式分泌IL．12。我们以ELISA法检测AML、CML实