临床医学毕业论文tgf-β和bdnf联合诱导成年大鼠bmsc向神经样细胞分化的研究

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1、TGF-P和BDNF联合诱导成年大鼠BMSC向神经样细胞分化的研宄姓名：2014年6月25日TGF-p和BDNF联合诱导成年大鼠BMSC向神经样细胞分化的研宄作者：梅晰凡，吕刚，王岩松，李全双，郭占鹏【摘要】目的探讨转化因子p(TGF-p)和脑源性祌经生长因子(BDNF)联合诱导成年大鼠骨髓基质细胞成神经细胞的可能性，为神经再生及脊髓损伤的治疗提供一种新方法。方法从大鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞并传至第5代，诱导前2h先用含1pg/L转化因子(TGF-P)及20%FBS的DMEM培养液培养，以促进细胞分裂，然后用脑源性神经生长因子(BDNF)作诱导剂，观察细胞形态的变化，并

2、采用免疫组织化学法检测诱导后的细胞表达NF,NSE,GFAP等特异性标志物。结果诱导后5h,部分细胞的形态已发生改变，12h后大部分细胞不仅在形态上表现为神经元样特征，而目NF及NSE等特异性抗体呈阳性表达，而GFAP抗体表达呈阴性。结论转化因子P(TGF-p)和脑源性神经生长因子(BDNF)能将骨髓基质细胞诱导成神经元样细胞。【关键词】骨髓基质细胞；转化因子(3;脑源性神经生长因子；细胞分化；神经元样细胞Abstract：ObjectiveTostudythepossibilitythattransforminggrowthfactor-pandbrain-derived

3、neurotrophicfactorinducesadultratbonemarrowstromalcells(BMSCs)intoneurons,andprovideanewmethodforneuronregenerationandthetreatmentofspinecordinjury.MethodsThebonemarrowstromalcellsfromadultratswereisolatedandculturedfor5passages.TheBMSCswereincubatedwithDMEMcontaining20%FRSandTGF-P(l

4、ig/L)

5、for2hours.ThenthemediawerereplacedbyDMEMmediaconsistingofBDNF(50gg/mL).Themorphologicalchangesofthecellswereobservedunderphasecontrastmicroscope,thecellswerestainedimmunocytochemicallywithNF,NSEandGFAPantibodiesrespectively.ResultsAfter5hourofinductionwithneurotrophicfactor,somecellsshowed

6、morphologicalchanges,and12hourslater，manyBMSCsbecameneuron-likecellsandwerestainedpositivelywithNF,NSEantibody,butnegativelywithGFAP.ConclusionsThebonemarrowstromalcellscandifferentiateintoneuronlikecellsbytheinductionoftransforminggrowthfactor-Pandbrain-derivedneurotrophicfactor.Keywords:

7、bonemarrowstromalcells；transforminggrowthfactor-p；brain-derivedneurotrophicfactor；celldifferentiationinduction；neuron-likecells近年来的基础研究发现脊髓损伤后采用组织工程方法，将有活性的种子细胞移植治疗脊髓损伤，能促使损伤轴突修复、再生和恢复脊髓部分神经功能，骨髓基质细胞(MSC)可为基因治疗祌经系统的疾病提供良好的载体［1］。骨髓基质细胞诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞及神经细胞的研究也见报道，为了探讨转化因子P和脑源性神经营养因子对骨髓基质细胞向神经

8、细胞联合诱导分化的可能性和条件，为以后神经细胞再生和脊髓内移植的研究奠定基础［2—3］，本研宄观察了转化因子P(transforminggrowthfactor-p，TGF-p)和脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)对成年人鼠骨髓基质细胞的诱导分化作用，现报告如下。1材料与方法1.1主要试剂和仪器TGF-(3和BDNF购自Sigma公司，小鼠抗特异性神经元烯醇化酶(NSE)单抗，小鼠抗神经丝蛋白(NF)革抗，小鼠抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单抗购自华美公司