禽脑脊髓炎病毒分离株全基因序列的测定及VP1蛋白表达

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1、摘要本研究根据Calnek疫苗株序列设计了3l条引物，利用反转录聚合酶链式反应，对我国AEV分离株kZ株的全基因组核苷酸序列进行了测定，同时，采用Bac-to-Bac系统在昆虫St9细胞中成功表达了AEVVPI基因，现将结果报告如下：对我国AEV分离株kZ株的全基因组核营酸序列测定的结果表明：该病毒株基因组全长为7059个核苷酸残基，包括494个核苷酸残基的5’非编码区、6402个核苷酸残基的开放阅读框和136个核苷酸残基的3’非编码区及耐y(A)尾巴。与已发表的AEV疫苗株l143的基因组序列比较发现，它们之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为98％和97．6％，与鸡胚

2、适应株VR的基因组序列比较核苷酸和氨基酸的同源性分别为93．9％和96．4％。结构蛋I皇I(VPl-VP4)中，主要宿主保护性免疫原蛋白VPl氨基酸之间差异较小，kZ株与疫苗株和鸡胚适应株VPl基因的氨基酸同源性分别为99．3％和98．5％。重组Ba蕊nid-VPl转染昆虫细胞SD后，获得的重组病毒，经SDS-PAGE可见表达的AEVVPl融合蛋白，大小约为35kD。经蛋白纯化用Westernblot检测，初步证实表达的AEVVPl蛋白具有抗原活性。关键词：禽脑脊髓炎病毒；全基因组序列测定；Bac．to-Bac系统：VPI基因表达Abstract31ofprimer

3、sweredesignedaccordingtopublishedCalnekvaccinestrainofAEV．Thecompletenucleofidesequenceofavianencephalomyelitisvirus(AEV)isolatekZfromChinawasdeterminedbyusingreversetranscriptasepolymera∞chainreac蛀on(RT-PCR)．Atthesametime，wehavesuccessfulexpressedAEVVPlgeneintheinsectcellbyusingBac-to

4、-Bacsystem．强eresultsarefollowing：L2Zstrainhasagem)mesizeof7059nt，谢ma494ntof57UTR,followedbyalongopenreadingfmme(ORF)of6402nt，anda136ntofYUTRandapoly(A)tail．Byr沁mpadng诚mthepublishedgenomicsequellceof觚VvaccinestralBl143。thereare98％nucleotideand97．6％aminoacididentifiesbetwe蝴llthem．mgenome

5、sequenceofAEVL2Zcomparaed谢ththevRstrainofAEv，thenucleofideandaminoacidsidentityisrespectively93．9％and96．4％．Ofstructuralproteins，VPIshowslessvariationinaminoacidsthananyoftheotherproteins．11艟alllinoaddhomologywas99．3％and98．5％respecfively’comparedwithStl'ain1143andVR．11地Bacmid-VpIWaStran

6、sfectedintOSpodopterafragiperda9(S丹)cellstogettherecombinantvirus．TheVP1proteinfromtheSf9cellsexhibitedamolecularmassofapproximataly35kDbysDS-PAGE．PurifiedvPlproteinusedtoWesternblot．TheantigenicityoftheAEvvPlproteinhasbeendetectedprimarily．Keywords：avianencephalomyelitisvims(AEV)；whol

7、egenomesequencedetermination，Bac-to—Bacsystem，vPlganeexpressionII英文缩写对照表英文缩写英文全称中文全称aminoacidAutographacallfornicanuclearpolyhedrusisvirus，AvianEncephalomyelitisAvianEncephalomyelitis慨agargelprecipitation(test)AmpicillinBaculovirusExpressionVectorSystembasepaircomplementaryDNAchicken