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《α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-环糊精的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、a■半乳糖昔酶法合成a■半乳糖基叩■环糊精的研究摘要：应用发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳糖基一卩一环糊精，研究其合成工艺。通过Box-Behnken设计等方法，得出工艺条件为ot—半乳糖昔酶用量73nkat，时间28h,pH6.3,温度40°C,振荡速度75r/min,反应体系包括2mL醋酸缓冲液，0—环糊精0・4mo1/L,蜜二糖0・8mo1/Lo在此条件下，a—半乳糖基一卩一环糊精绝对产率为28.4%,比优化前提高了41.3%。关键词：a—半乳糖昔酶；酶法合成；a—半乳糖基一卩—环糊精；中图分类号：TS273文献标识码：
2、A文章编号:0439-811419-4041-03EnzymaticSynthesisofa—Galactosyl一卩一cyclodextrinbya—galactosidaseSHENWang—yangl,JINZheng—yu2,GAOHong3Abstract：Parametersaffectingthesynthesisofa—ga1actosyl—卩一cyc1odextrinbya—galactosidaseofgerminatingcoffeebeansweresystematica11ystudiedbyBox—Beh
3、nkendesign.Theoptimizedconditionswereasfollows,enzymeconcentration,73nkat；Reactiontime,28h；pH,6.3；Reactiontemperature,40°C；Osci1latoryspeed,75r/min；0—cyc1odextrin,0.4mo1/L；me1ibiose,0.8mo1/L；andacetatebuffer,2mL,Theyie1dofa—galactosyl一卩一cyc1odextrinwas28.4%undertheseco
4、nditions,whichwas41.3%higherthanconditionsbeforeoptimization.Keywords：a—ga1actosidase；enzymaticsynthesis；a—ga1actosy1—p—cyclodextrin环糊精具有内疏水、外亲水的特殊性质，在制药、化工、食品等领域被广泛地研究及应用。但其溶解性能不佳，制约了进一步的应用研究。改性制备分支环糊精，可以扩大分子亲水区域，提高溶解性［1一4］。a—半乳糖基一卩一环糊精是一种分支环糊精，是卩一环糊精的衍生物，其具有较高的水溶性，分支
5、上的半乳糖基在动物组织中具有特殊的识别受体，具有广阔的应用前景［5—7］。前期研究工作采用江南大学食品科学与技术国家重点实验室自制的发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶酶法合成得到a—半乳糖基一p—环糊精，并成功地鉴定了其结构。本实验以0—环糊精和蜜二糖为原料，优化发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳糖基一卩一环糊精的工艺，有利于提高酶法合成的产量和效率,进而指导生产。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶为江南大学食品科学与技术国家重点实验室自制［8］；对硝基苯酚—a—半乳糖昔和蜜二糖购于Sigma-Aldrich贸易
6、有限公司；其余试剂均为国产分析纯。1.1.2仪器与设备Waters600高效液相色谱仪，美国Waters公司；Direct—Q3超纯水系统，美国Mi11ipore公司；De1ta320pH计，梅特勒一托利多仪器有限公司；XW-80A漩涡混合器，上海医科大学仪器厂；80-2离心机，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；HW.YS电子恒温水浴锅，浙江舟山海源仪器厂。1.2方法1.2.1酶法合成反应将p—环糊精、蜜二糖和发芽咖啡豆01—半乳糖昔酶溶解于2mL醋酸缓冲液中，使反应缓冲液中包括P-环糊精0.4mo1/L、蜜二糖0.8mo1/L、a
7、—半乳糖苜酶50nkat。由于水溶性较差，混合体系中的卩一环糊精不能完全溶解，呈现过饱和状态，将盛有反应缓冲液的容器置于恒温振荡器中，进行酶法合成反应，反应条件为30°C,100r/mi11反应36h。反应结束后煮沸10min,使a—半乳糖苜酶充分灭活。灭活后的混合液5000r/min离心5min,取上清液［8,9］。1.2.2a—半乳糖基一卩一环糊精的高效液相色谱分析及制备①高效液相色谱分析酶法合成反应后的上清液。泵‘Waters600；色谱柱，Hypersi1Asp-1-NH2柱；流动相，75%乙月青；检测器，Waters241
8、0差示折光检测器；柱温，30°C；流速,1.0mL/min；进样量，20
9、iL0②采用制备型高效液相色谱对上清液进行分离纯化，对应特征吸收峰收集各组分，得到所需产品。泵‘Waters1525；色谱柱,SunFireTMOBDTMPre
