ifg-1与bfgf联合应用诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究

《ifg-1与bfgf联合应用诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、lGF一1与bFGF联合应用诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究计：学位论文：40页表格：5个插图：24幅张玉鹏指导教师：张卫国教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：外科学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我

2、一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：勉坌!!垦：签字日期：‘_缉』月i日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5／、—1L——L(一)日!J舌⋯”⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·i⋯⋯⋯⋯·30(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40lGF一1与bFGF联合应用诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究硕士生姓名：张玉鹏指导教师：张卫国教授专业

4、名称：外科学摘要目的：联合应用碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)与胰岛素样生长因子IGF．1作为诱导剂探讨向肌腱细胞方向转化的诱导技术，以探索一种新的肌腱组织工程种子细胞的获取方法。方法：1．分离、培养大鼠BMSCs并进行分子生物学鉴定：密度梯度离心法体外分离BMSCs，并对培养的BMSCs进行干细胞表型鉴定与成骨、成脂肪及成软骨多向诱导确定所获取的BMSCS是具有多向分化能力的BMSCs。2．观察bFGF和IGF．1联合应用对BMSCs向肌腱细胞分化的作用：将BMSCs随机分为4组，即实验组A(I

5、GF．I+bFGF)、实验组B(IGF一1)、实验组C(bFGF)及空白对照组D于37。C、5％C02孵箱中培养。用相差显微镜观察细胞形态的变化：RT．PCR方法检测各组细胞内I型胶原、III型胶原以及scleraxismRNA在3天、7天、14天和21天时的表达水平；免疫荧光染色检测各组细胞内I型胶原、III型胶原14天的表达水平。结果：1．分离培养的BMSCs在形态学上表现为长梭形、呈漩涡状生长。流式细胞仪检测结果显示细胞表面CD29和CD90表达阳性，分别为99．24％、99．06％；CD45表达阴性，为98．71％。BMSCs经诱导后茜素红、油红

6、O、甲苯胺蓝及II型胶原免疫细胞化学染色均为阳性。2．诱导后的BMSCsA组、B组、C组、与空白对照组相比其I、III、SCX在基因及蛋白水平上具有显著差异，从3天开始不断递增，14天后转而下降，以7天至14天的变化最明显与空白对照组差异最大。而在A、B、C三组中，以B组I、III、SCX基因的表达最明显，免疫荧光染色检测中B组细胞内I型胶原、III型胶原的表达水平最高。结论：大鼠BMSCs体外诱导各组所获得的细胞与阴性对照组细胞在形态与功能上存在显著差别，其形态特征及胞内基质表达近似肌腱细胞；尤其是IGF．1组。bFGF与IGF—I两种细胞因子联用没有

7、明显明显协同效应。关键词：骨髓间充质干细胞肌腱细胞碱性成纤维细胞生长因子胰岛素样生长因子．12ExperimentalstudyonBMSCsinducedtotendoncellsbyIGF-·1andbFGFMasterdegreecandidate：ZhangYupengSupervisor：ProfessorZhangWeiGuoMajor：SurgeryAbstractObjective：ToinvestigatethenewmethodofinducingBonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)todiffr

8、enciateintotendoncellsbybasicfibroblastg