左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用

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1、青岛大学硕士学位论文左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用姓名：尹晓琳申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：孔庆兰20120522左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用摘要目的原代培养新生大鼠视网膜神经细胞，建立高糖模型后，探讨左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞保护作用。方法取出生后1-3dSD大鼠视网膜，0．25％胰蛋白酶消化制成不同大小细胞团的悬液，接种于包有多聚赖氨酸的培养瓶中培养，用倒置相差显微镜观察细胞形念变化，取7-9天细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光鉴定。取8—10天的细胞进行

2、试验，实验设计为5组：J下常细胞培养组(对照组)、高糖模型组、高糖模型组+左卡尼汀(501Jmol／L)、高糖模型组+左卡尼汀(1001amol／L)、高糖模型组+左卡尼汀(200tJmol／L)，用MTT法检测细胞OD值来反映视网膜神经细胞活性，以电子自旋共振法(ESR)检测各组一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)的释放来反映氧化应激程度。结果免疫荧光显示，培养的细胞大部分抗神经元特异性烯醇化酶抗体反应阳性。MTT结果显示高糖模型细胞活性显著降低(只0．05)，左卡尼汀浓度1001amol／L，作用时间48h时对视网膜

3、的保护作用最好。浓度200umol／L时，对神经细胞产生毒性作用。ESR检测结果示高糖使细胞生成NO、ROS增多(尺0．01)，左卡尼汀能明显抑制NO、ROS的生成。结论高糖条件下视网膜神经细胞NO、ROS生成增多；左卡尼汀能抑制高糖条件下视网膜神经细胞氧化应激反应。硕士研究生尹晓琳(眼科学)指导教师孔庆兰主任医师关键词：细胞培养；左卡尼汀；糖尿病视网膜病变；氧化应激／煳嬲ProtectiveeffectofL-Carnitineontheratretinalnuroncellsinhigh-glucoseAbstra

4、ctOBJECTIVE：Buildingaprimarycultureofneonatalratretinalneuralcellsi11vitrocellular,thenestablishthemodeloftheretinalneuralcellsinducedbyhighglucoseaftergivingL-Camitine，toinvestigatetheeffectofL-camitineontheratretinalnuroncellsinhi曲·glucose．METHoD：Cellsuspensio

5、nwithdifferentsizesofeellaggregatesWaSmadefrompostnatal1—3daysSprague—Dawratsbyusing0．25％trypsindigestion，andthenitwasplantedtocultureflaskscoveredwithPoly-L—lysine．TheeellgrowthWaSobservedbyphasecontrastmicroscope，andthecells(7-9days)wereidentifiedbyimmunefluor

6、escencebyusingneuron-specificenolase(NSE)．Theexperimentusedcells(8-10days)，andwasdividedintofivegroups：normalcellculturegroup(controlgroup)，highglucosecellularmodelgroup,hi曲sugarcellularmodelgroup+L—camitine(50pmol／L)，highsugarcellularmodelgroup+L—camitine(100pm

7、ol／L)，hi曲sugarcellularmodelgroup+L·carnitine(200pmol／L)．CellviabilityWaSdeterminedbyMTLoxidativewasdisplayedbyusingelectronspinresonances(ESR)todissectthereleaseofnitrogenmonoxide(NO)andreactiveoxygenspecies(ROS)．RESULT：MostretinalneuralcellswereNSE-positivedete

8、ctedbyimmunofluorescence．Cellviabilitydecreasedobviouslyinhigh-glucose(P