左卡尼汀对高糖致雪旺细胞损伤的保护作用及可能机制

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1、分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012602362硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：左卡尼汀对高糖致雪旺细胞损伤的保护作用及可能机制TITLETheprotectiveeffectofL-carnitineoninjuryinSchwanncellsinducedbyhighglucoseandthepossiblemechanism一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：杨春梅指导教师：高春霖天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012

2、602362学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：左卡尼汀对高糖致雪旺细胞损伤的保护作用及可能机制TITLETheprotectiveeffectofL-carnitineoninjuryinSchwanncellsinducedbyhighglucoseandthepossiblemechanism一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：杨春梅指导教师：高春霖天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立

3、进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论

4、文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：左卡尼汀（L-carnitine,LC）可用于糖尿病周围神经病变（diabeticperipheralneuropathy,DPN）的临床治疗，但其作用是否与抑制高糖致雪旺细胞（Schwancells,SC）的损伤有关有待研究，本研究通过建立高糖诱导的大鼠雪旺细胞系RSC96的损伤模型，拟探讨左卡尼汀对高糖诱导下雪旺细胞损伤的影响及可能机制，为明确其治疗DPN的机制提供新的理论参考。4方法：将离体的大鼠雪旺细胞株（RSC96

5、），以1.5×10/ml的密度接种于596孔板（200μl/孔）或以2×10/ml的密度接种于6孔板（2ml/孔）。1、将上述细胞分别于设定的葡萄糖终浓度为25mmol/L、50mmol/L、100mmol/L的培养基中培养48h，采用甲基四唑蓝（3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT）测RSC96的细胞活性，依据结果选择合适的高糖浓度。然后分别在LC终浓度为10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μm

6、ol/L培养液中处理细胞，测定48h后细胞活性，根据MTT结果选择最佳左卡尼汀药物浓度。为排除高糖引起的渗透压对实验结果的影响，设甘露醇组作为对照组。2、根据上一步实验结果，本部分实验选择高糖刺激浓度为50mmol/L，左卡尼汀药物终浓度为50μmol/L。将RSC96细胞随机分为五组：正常对照组(C组)、高糖组（H组）、高糖+左卡尼汀组（H+L组）、单独左卡尼汀组（L组）、甘露醇组（M组），培养48h后，观察各组生长状况并分别拍照；测定各组细胞凋亡率；测定各组细胞SOD的活力以及MDA的含量；采用WesternBlot方法检测各组

7、细胞内聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶-1（PARP(poly(ADP-ribose)polymerase-1),PARP-1）、门冬氨酸特异半胱氨酶3(Cysteineaspartate-specificprotease-3,Caspase-3)的蛋白表达。结果：1、MTT结果显示，高糖处理后细胞活性降低，并且损伤效应呈现剂量依赖性。使用浓度为50mmol/L高糖培养48h会导致细胞活性降为C组活性的58％(P<0.05)，引起细胞增殖活性显著降低，因此选择50mmol/L作为后续实验的高糖剂量。左卡尼汀培养液对正常雪旺细胞增值活性无明显

8、影响（P＞0.05)，但可以显著改善高糖所致的雪旺细胞活性降低，结果显示左卡尼汀浓度为50μmol/L时的细胞活性显著高于其他剂量组，因此选择50μmol/L的左卡尼汀作为后续实验的药物剂量。2、与C组相比，H组和H+L组贴壁细胞减少