左卡尼汀对体外高糖培养鼠视网膜muller细胞的保扩作用及机制

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1、左卡尼汀对体外高糖培养鼠视网膜Miiller细胞的保护作用及机制中文摘要目的：观察体外培养大鼠视网膜Mtiller细胞在高糖条件下细胞活性、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)的变化，研究左卡尼汀(L．carnitine，LC)对其作用的影响，探讨LC对Mijller细胞的保护作用及机制。方法：取出生1。3天SD大鼠视网膜，反复胰酶消化法纯化Mtiller细胞，进行GS、GFAP单标及双标免疫荧光鉴定。用台盼蓝染色法观察不同浓度葡萄糖对Miiller细胞生长状态及存活率的影响，确立高糖浓度。将

2、Mtiller细胞随机分为正常对照组、高糖组和不同浓度LC处理组，LC处理组在高糖培养液中分别加入终浓度为50、l00、200umol／LLC。MTT法检测细胞活性，Hoechst33342染核检测细胞凋亡，流式细胞仪检测细胞内ROS和MMP的变化。结果：免疫荧光显示，体外培养的细胞大部分抗GS、GFAP抗体反应阳性，该方法培养的Mtiller细胞纯度可达90％以上。MTT结果显示，高糖培养组细胞活性显著下降(P<0．05)，LC处理后细胞活性上调，以100umol／LLC作用最佳。ROS检测结果

3、显示，高糖损伤后细胞内ROS水平明显高于正常对照组(P<0．05)，Lc处理后，ROS值均低于高糖培养组(P<0．05)。MMP检测结果显示，高糖损伤12h后，细胞MMP较正常对照组显著下降(P<0．05)，Lc处理后，MMP均高于高糖培养组(尸

4、膜电位，抑制细胞的凋亡。硕士研究生．张莹(眼科学)指导教师孔庆兰教授曹玉副教授关键词：左卡尼汀；视网膜Miiller细胞；活性氧；线粒体膜电位：凋亡ProtectiveeffectandmechanismofL—CarnitineontheratretinalMiillercellsinhigh—glucoseAbstract0bjective：ToinvestigatetheprotectiveeffectofL—carnitine(LC)oncellviability，reactiveoxyg

5、enspecies(ROS)，mitochondrialmembranepotentials(MMP)ofculturedratsMfillercellsinducedbyhighglucoseinvitroandthepossiblemechanism．Methods：Mtillercellsweresepratedandpirifiedfromtheretinaof1—3daySDrats．Thecellswereidentifiedbyimmunofluorescencebyusingglu

6、taminesynthetase(GS)，glialfibrillaryacidicprotein(GFAP)．TrypanbluestainingwasusedtoobservetheeffectofdifferentconcentrationsofglucoseonthegrowthandsurvivalstatusofMfillercells．TheMfillercellswererandomlydividedintocontrolgroup，highglucosegroupandtheLC

7、—treatedgroupwithdifferentconcertrations．ThecellsinLC—treatedgroupwereculturedinhighglucosemediumwith50，100，200umol／LLC．CellviabilitywasdeterminedbyMTT．ApoptosisratewasmeasuredbyHoechst3342．ROSandMMPwereevaluatedbyflowcytometer．Results：Immunofluoresce

8、nceshowedthatmostcellswerepositiveforanti—GS，anti—GFAPantibodyresponses，thepurityofMfillercellswasabove90％．Cellviabilitydecreasedobviouslyinhighglucose(P<0．05)，anditcanbeincreasedafterinterventionbyLC，andthebesteffectisthe100umol／L．ROSlevelinh