左卡尼汀对体外高糖培养鼠视网膜Muller细胞的保扩作用与机制

《左卡尼汀对体外高糖培养鼠视网膜Muller细胞的保扩作用与机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一章实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．1实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4第二章实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52．1SD大鼠视网膜MtHler细胞的原代培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52．2SD大鼠视网膜Mtiller细胞的

2、纯化培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62．3视网膜M-ciller细胞形态学观察及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．62．4高糖模型的建立及实验分组⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72．5MTT法检测细胞活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82．6细胞内ROS水平的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．7Hoechst33342染色检测细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．92．8细胞线粒体膜电位的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92．9统计分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10第三章实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113．1原代培养SD大鼠视网膜混合细胞形态学观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．113．2Mtiller细胞的纯化培养观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113．3免疫荧光法鉴定纯化培养的Mtiller细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．113．4葡萄糖浓度的筛选及高糖模型的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．113．5高浓度葡萄糖及Lc处理对视网膜Miiller细胞活性的影响⋯⋯⋯⋯123．6Lc对高糖培养视网膜Mtiller细胞ROS水平的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．123．7L

4、C对高糖损伤视网膜Mtiller细胞凋亡的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．143．8Lc对视网膜Miiller细胞线粒体膜电位的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14第四章讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．164．1视网膜Mtlller细胞的纯化培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．2高糖及Lc处理对视网膜Mtlller细胞活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．174．3高糖及Lc处理对视网膜Mtiller细胞内ROS水平的影响⋯⋯⋯⋯．．184．4高糖及Lc处理对视网膜Miiller细胞凋亡的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．194．5高糖及Lc处理

5、对视网膜Mtlller细胞MMP的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33综述参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45攻读学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．55引言糖尿病视网膜病变(DiabeticRetinopathy，DR)是糖尿病最为常见、最严重的慢性并发症之一，发病率随着糖尿病病程的延长而增高【lJ，是世界上最主要的致盲性眼病之一12]，严重威胁人类的生存质量。但目前关于DR的发病机制还不完全明确。既往对DR的发病机制和治疗的研究主要从视网膜微血管方面考虑，认为早期DR以周细胞丢失、内皮细胞增生、毛细血管基底膜增厚、新生血管形成、微血管瘤形成等为特征。最近有研究表明，视网膜神经元和视网膜胶质细胞的损害在视网膜微血管

7、病变发生之前，在糖尿病早期视网膜神经细胞就出现明显的凋亡【3，4】。MUller细胞是视网膜中最主要的胶质细胞，其在维持正常的视网膜功能和结构等方面具有非常重要的作用。研究表明，Miiller细胞在DR早期视网膜血管病变之前其形态结构和生理功能既已发生变化【5J。近年有研究表明，线粒体活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成过多及其引起的氧化应激损伤可能是糖尿病并发症的共同发病机制【6，71。生理状态下，ROS参与信号的传导、参与细胞免疫反应、调控基因表达，具有重要的生理作用。机体通过自身的酶系统或非酶抗氧化剂清除体内不断产生的ROS，使

8、其产生和清除保持动态平衡