stathmin参与调控hrs细胞向b细胞分化机制的初步研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文stathmin参与调控H／RS细胞向B细胞分化机制的初步研究PreliminarystudyonthemechanismsofstathmininvolvesinthedifferentiationofH／RScellsintoBcells课题来源：国家自然科学基金(81071941)专业名称病理学与病理生理学学位申请人钟琳指导教师赵彤教授答辩委员会主席丁彦青教授答辩委员会成员张雅洁教授钟雪云教授申洪教授李建明教授论文评阅人朱梅刚教授钟雪云教授2012年5月20E／广州硕士学位论文stathm

2、in参与调控H／RS细胞向B细胞分化机制的初步研究硕士研究生：钟琳指导教师：赵彤教授摘要研究背景：霍奇金淋巴瘤(Hodgkiniymphoma，HL)是一种淋巴造血系统的恶性肿瘤，其中经典型霍奇金淋巴瘤(classicHodgkinlymphoma,eHL)约占霍奇金淋巴瘤病例的95％。该疾病为单克隆性淋巴细胞肿瘤，病变的典型形态特点是由少数的单核的霍奇金(Hodgkin)细胞和多核的Reed-Steinberg(RS)细胞组成H／RS细胞，背景中有数量不等的非肿瘤性背景细胞。约98％以上的H／RS细胞起源于生发中心阶段分化的成

3、熟B细胞，极少数起源于外周T细胞。本课题组在探究CD99+／mCD99L2．调控B淋巴瘤细胞与H／RS细胞转化靶蛋白及信号通路的研究中，前期构建稳定过表达CD99基因的cHL(B细胞来源)L428细胞株⋯L428．CD99细胞亚系和稳定敲低CD99基因的鼠B细胞来源淋巴瘤A20细胞株⋯LV．mCD99L2．A20亚系，将L428、L428．CD99细胞及A20、LV．mCD99L2．A20细胞分别进行双向凝胶电泳实验，经生物信息学分析比对，从差异蛋白中挑选出stathmin蛋白作为研究对象。stathmin蛋白是一种广泛存在于细

4、胞质中高度保守的磷酸化蛋白，属于微管调节相关蛋白，能通过调节微管解聚，参与微管的组装，调节微管动态平衡：还能与多种蛋白相结合，参与细胞周期、增殖、运动等许多细胞内生物进程；与肿痛的发生关系密切，在多种恶性肿痛中高表达。值得注意的是，近年来研究发现stathmin在细胞分化过程中起了十分重要的摘要作用。有文献表明，在正常淋巴造血系统中，stathmin参与T淋巴细胞在胸腺组织的成熟过程：stathmin表达的下降促使巨核细胞分化成熟及血小板的形成。在淋巴造血系统肿瘤中，Stathmin蛋白表达对于维持和转变白血病细胞表达至关重要。

5、然而，stathmin是否参与B细胞分化过程，在B细胞分化过程中呈现怎样的趋势，未见报道。为此，本研究采用免疫组织和细胞化学、实时荧光定量RT．PCR、Westernblot、免疫荧光共聚焦显微镜检测等方法，观测stathmin在病理组织和淋巴瘤细胞中的表达与定位；干扰stathmin基因后检测浆细胞相关转录因子PRDMl的表达、浆细胞免疫表型的表达及细胞生物学行为的改变，明确stathmin是否参与H／RS细胞向末端B细胞方向分化；调控与cHL最密切相关的NF．kappaB通路，探究NF．kappaB通路、stathmin、P

6、RDMl的调控关系及诱导分化可能性，为进一步阐述H／RS细胞的发生和发展、转化与分化机制提供参考依据。研究目的本研究拟通过四部分进行：一、Stathmin在B淋巴瘤组织和细胞株的表达收集不同分化阶段的B细胞淋巴瘤组织和细胞株，检测stathmin的表达，探究stathmin在B细胞分化阶段的表达规律。二、Stathmin在eHL细胞株L428和L428．CD99细胞表达与定位检测cHL细胞株L428及L428．CD99亚系stathmin的表达及细胞内定位。三、调节stathmin促进H／RS细胞向末端B细胞方向分化探究stat

7、hmin与B细胞分化的关系，明确L428和L428．CD99细胞下调stathmin基因对浆细胞分化调控因子PRDMI的调控关系、分化相关抗原的改变和对细胞生物学行为的影响，揭示stathmin基因在cHL分化所扮演的角色。四、NF．1cB信号通路调控stathmin影响H／RS细胞向末端B细胞方向分化通过激活和抑制NF．r．B信号通路，探究stathmin是否通过NF．rB信号通路参与胍S细胞向末端B细胞方向分化。n硕士学位论文研究内容与方法一、Stathmin在B淋巴瘤组织和细胞株的表达收集反应性淋巴结增生(reactive

8、lymphoidhyperplasia，RH)、cHL、生发中心样(germinalcenterBcell．1ike，GCB)和活化B细胞样(activatedBcell．1ike，ABC)型弥漫大B淋巴瘤(DiffuselargeBcelllymphoma，D