胰腺癌中microrna-216a表达下调靶向调节jak2抑制细胞增殖

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1、2009级汕头大学硕士学位论文硕士学位论文胰腺癌中microRNA-216a表达下调靶向调节题目JAK2抑制细胞增殖MicroRNA-216afrequentlydownregulatedinpancreaticcancerinhibits英文题目cellproliferationbytargetingJAK2姓名崔鹏学号10920170所在学院汕头大学医学院导师姓名侯宝华专业外科学入学日期2009年9月答辩日期2012年5月I2009级汕头大学硕士学位论文学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的

2、地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日II2

3、009级汕头大学硕士学位论文胰腺癌中microRNA-216a表达下调靶向调节JAK2抑制细胞增殖中文摘要研究背景胰腺癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，在我国胰腺癌的发病率逐年上升，目前已跃居全身肿瘤第6位。总体上讲，胰腺癌病因复杂，发生发展中具有异质性。胰腺导管腺癌是最常见的胰腺癌类型，根治性手术对于可切除性肿瘤患者仍是唯一可以获得长期生存的治疗方法。然而，胰腺癌早期诊断困难，易侵袭，对各种治疗缺乏敏感性，预后较差，死亡率几乎等同于发病率。过去的25年间，胰腺癌总体预后并无明显改善，5年生存率小于5%，中位生存时间约5～6个月。胰腺癌的发病形势日益严峻,病死率一

4、直居高不下,目前对胰腺癌的生物学标志进行了大量而广泛的研究,包括基因标记、血清学标记和细胞学标记等,由于这些指标的特异性和敏感性各有差异,利用这些免疫标志物进行诊断仍有很多缺陷,需要有对胰腺癌的诊治有临床意义更好的指标。目前胰腺癌的基因诊治是研究热点之一。microRNAs(miRNAs)是由20-25个核苷酸所组成的小分子单链RNA，可通过碱基互补配对结合靶基因的3’非编码区（UTR），影响mRNA翻译和蛋白合成。miRNAs属基因负调控因子。可在转录后水平调控靶基因的表达，从而影响细胞的发育、分化和凋亡等，近年来研究发现，胰腺癌组织、细胞株、癌前病变、和血浆

5、中均存在miRNAs表达谱异常，提示miRNAs可能在胰腺癌发生和发展机制的研究、诊断、治疗和预后判断中具有一定应用价值。研究目的本研究旨在检测miR-216a在胰腺癌组织与非胰腺癌组织中的表达，筛选并验证miR-216a与细胞增殖有关的靶基因JAK2，合理联系miR-216a与JAK/STAT通路。研究方法1.20例胰腺癌组织与非胰腺癌组织中总RNA的提取。采用agilent人microRNA寡核III2009级汕头大学硕士学位论文苷酸基因芯片在基因组范围内检测组织标本的microRNA基因表达谱，差异基因的筛选标准是microRNA相对表达量大于或等于对照组

6、2倍。2.应用TargetScanHuman5.1、microrna.org、mirbaseandPicTaralgorithms预测并筛选miR-216a与细胞增殖有关的靶基因。3.JAK23’UTR与mutJAK23’UTR测序，预测结合位点，扩增，PCR钓取基因，目段片段（JAK23’UTR或mutJAK23’UTR）与载体（PsiCHECK-2）连接，miR-216amimics与miR-216ainhibitor（miR-216a反义链）合成。NC（negativecontrol；随机合成的一条碱基链）及NCinhibitor（NC的反义链）的合成。4

7、.PANC-1细胞培养，microRNA与质粒共转染细胞，Lucifersae检测。5.miR-216amimics与miR-216ainhibitor转染PANC-1细胞，WesternBlot检测JAK2蛋白表达。6.采用SPSS13.0软件分析，miR-216a的表达量以log2转换样本归一化(normalization)后的芯片扫描信号值为记。胰腺癌组与良性病变组miR-216a的表达差异采用独立样本T检验，计量资料均数间的比较采用单因素方差分析，以双侧检验P<0.05为有统计学意义。研究结果1.20例胰腺标本的RNA浓度测定:所有样品A260/A280

8、在1.8～2.0之间,R