下调rbap48表达抑制人消化道肿瘤细胞的增殖

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕去学位论文下调ＲｂＡｐ４８表达抑制人消化道肿瘤细胞的増殖ＫｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＲｂＡ４８ｅｘｒｅｓｓｏｎｌｅａｄｓｔｏｔｈｅｉｎｈｉｉｏｎｏｐｐｉｉｂｔｆｈｕｍａｎｄｉｇｅｓｔｉｖｅｔｒａｃｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｐ杨旭锐导师姓名饶进军专业名称药理学培养类型学术型论文提交日期２０巧年３月＇ｔ？ｉ－南方医科大学２０１２级硕±学位论文下调ＲｂＡｐ４８表达抑制人消化道肿瘤细胞的増殖ＫｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＲｂ

2、Ａ４８ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅａｄｓｔｏｔｈｅｉｎｈ化ｉｔｉｏｎｏｆｐｐｈｕｍａｎｄｉｅｓｔｉｖｅ杜ａｃｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｒｏＵｆｅｒａｔｉｏｎｇｐ课题来源：广东省教育部产学研结合项目（２０１２８０９１１００４６引学位申请人杨化锐导师姓違饶进军专业若称药理学培养类型学术型培养层次硕击所在学院药学院答辩委员会主席雷林生答辩委员会委頁陈丽君李晓媽－邱小忠朱正光，２０１５年０３月２５日广州硕去学位论文下调化Ａｐ４８表达抑制人消化道肿瘤细胞的增殖硕壬研究生：杨旭锐指

3、导老师：饶进军摘要研究背景：一消化道肿瘤是最常见的恶性肿瘤之。食管癌、大肠癌、胃癌等的发病率一直位居各种癌症的前列和死亡率。当前对消化道肿瘤的治疗主要采用手术、放疗Ｗ及化疗，且，寻，但是放、化巧的毒副作用明显效果并不令人满意。因此找新的药物治疗祀点显得尤为重要。－３＾３１防化＾－灿乂４８（＆６＾〇〇１？１３５化１１１３５５〇６（１口１１１４８）属＼＼〇４０蛋白家族，最初被口鉴定为Ｒｂ蛋白的结合蛋白，其分子量为４８ｋＤａ。ＲｂＡｐ４８参与多种复合物的作用，比如ＡＴＰ－Ｓ３组装因子与ＤＮＡ依赖重组复合物ｉｎ，组蛋白脱乙醜酶复合物，

4、染色体－序列配对复合物ＣＡＦ１，核染色质重构和脱乙醜酶ＮｕＲＤ。近期研究发现ＲｂＡｐ４８一Ｐ＾Ｐ是ｃＧ（Ｉｏｌｙｃｏｍｂｇｒｏｕｐｒｏｔｅｉｎ，ＰｃＧ）的主要成员之，ｃＧ能特异性催化组ｐ蛋白Ｈ３第２７位赖氨酸甲基化，从而实现靴基因的沉默。研究发现ＲｂＡｐ４８在肺癌、宫颈癌、甲状腺癌、急性髓细胞白血病、原发性肝癌等恶性肿瘤中均呈现异常高表达，这表明民ｂＡｐ４８与肿瘤的发生、发展有密切关系。本课题组前期研究发现下调ＲｂＡｐ４８基因表达能抑制肺癌细胞生长并逆转其顺钻耐药性。由此本研究设想：下调民ｂＡｐ４８表达也可能对消化道肿瘤的生长Ｒｂ

5、Ａ一繁適存在抑制作用；ｐ４８可能是治巧消化道肿瘤的个潜在祀点，为此我们进行了相关的研究。Ｉ第一部分下调ＲｂＡ４８表达对人食管癌细胞増殖作用的研究ｐ目的：研究下调ＲｂＡｐ４８表达对人食管癌细胞増逆的作用，探索ＲｂＡｐ４８作为食管癌治疗鞭点的可能性。方法１、免疫組化检测ＲｂＡ４８在食管癌组织及：ｐ其癌旁组织中的表达。２、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ｓｉＲＮＡ干扰ＲｂＡｐ４８表达效果。３、民ｂＡ４８－ｓＴＴ法检ｐｉＲＮＡ转染细胞后：①Ｍ测人食管癌细胞ＥＣ１０９、人正常上皮细胞Ｌ１３２生长情况。②平板克隆形成实验检测ＥＣ１０９细胞克

6、隆形成能为变化。⑤ＭＴＴ检测ＥＣ１０９、ＥＣ１０９／ＤＤＰ细胞对顺钻敏感性变化。４、体内实验：ＢＡＢＬ／Ｃ－裸鼠皮下接种ＥＣ１０９成瘤后，瘤内注射艮ｂＡｐ４８ｓｉＲＮＡ，比较肿瘤生长差异。５、①ｅ－。半乳糖酌酶染色法检测细胞衰老情况②流式细胞术检测细胞周期变化及细胞调亡。结果：１、民ｂＡｐ４８在食管癌组织中表达明显高于其癌旁组织中的表达－ｓＡ。２、ＲｂＡｐ４８ｉＲＮＡ能有效下调ＥＣ１０９细胞株中Ｒｂｐ４８的表达。３、艮ｂＡ４８－ＲＮＡＲｂＡ４８－ｓｉ９ｐｉ转染细胞后：①阴性对照组与ｐｓＲＮＡ组ＥＣ１０细胞的＋％、％Ｏ－抑制率分别为：１８

7、．５４２．８０４５．２４＋２．７４．Ｏｌ民ｂＡ４８ｓｉＲＮＡ组抑制（）（）（ｐ），ｐ率明显升高１３２细胞生长抑制率无显著变化＞０．０５，而正常上皮细胞株Ｌ（ｐ）；②４８－ＲＮＡ组克５＋１空白组、阴性对照组、民ｂＡｐｓ３００、１６１０ｉ隆形成数分别为化．００．．０±１１５３１０１００＋３１ＲｂＡ４８－ＲＮＡ组＜１．和．．６，ｐｓｉ克隆形成数明显减少（ｐ０．０）。⑨顺拍对ＥＣ４－ｓＲＮＡ组细７６１０９空白組、阴性对照组和民ｂＡｐ８ｉ胞的ＩＣ５０值分别为４．±０．０９肿ｏｌ／Ｌ、２．８７±０．１４阿ｏｌ／Ｌ、０．８９±０．０２Ｍｍｏｌ／Ｌ