基于氨基酸氧化酶的α--氨基酸的手性拆分

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1、浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝’江盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：洳雨L／签字日期：加J乞年弓月P日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝望盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

2、进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：妣1制签字日期：劲1L年；月汐日导师签名：哪Z△、签字日期：如I二年与月7睁致谢本论文是在导师张子张教授的严格要求与悉心指导下完成的。张老师深厚的理论功底、娴熟的实验技能、渊博的知识、一丝不苟的科研态度和专心忘我的工作精神将使我受益终生。在这两年半的时间里，张老师在学习、生活和科研方面都给予我无微不至的关心和帮助，经常性地进行交流与指导，让我在各方面得以稳步成长，在此，谨向张老师致以我最衷心的感谢和最美好的祝愿。感谢合作导师郭老师在有关生物菌体

3、方面给我的指导和帮助。郭老师在生物领域方面的专业性以及乐观的生活态度，是我以后学习和生活的榜样，祝愿郭老师以后一切顺利。感谢潘远江老师课题组在质谱测定方面提供的帮助，感谢何玲老师在核磁测定和解析方面的帮助和指导。感谢本课题组杨锦师弟在实验过程中对我的热心协助。最后，向所有关心和帮助我的老师、亲人和朋友致以最真诚的祝福。姚皖2012年1月摘要摘要Q．氨基酸对于生命过程研究和生物医药开发有重要意义。Q．氨基酸是蛋白质的主要组分，是生物体中最重要的氨基酸，而所有人体内组成蛋白质的氨基酸则都是Q．氨基酸。自然界存在的20种氨基酸中，除甘氨酸外，Q．氨基酸都是手性的，它们各自发

4、挥着其独特的功能，与人们的生存、生命息息相关。然而，天然氨基酸数目有限，非天然氨基酸则多为外消旋体，且D．型和L．型对映体的生理作用迥异。本文通过生物催化的方法对外消旋的Q．氨基酸进行手性拆分。生物催化中常用的有机体主要是微生物，其本质是利用微生物细胞内的酶进行催化，促进生物转化的进程。酶催化的反应对底物具有高度立体专一的特性，这种性质可用于使外消旋体中的某一异构体参加酶促反应，被消耗为另一物质，而另一异构体不受影响，但性质与消耗后形成的物质明显不同，使利用～般物理分离方法将两个对映体的拆分变为可能。本文实验过程主要分为三个方面：1．通过对微生物的筛选确定各类微生物对

5、Q．氨基酸的手性选择：选取DL-Met为反应底物，通过对多种微生物菌株的筛选，进行D-Met和L-Met的拆分，从中筛选出具有高选择性和高效率的菌株。2．选取纤细酵母菌(Rhodotorulagraminis，R．g．)作为反应菌株，并对R．g．提供的LMO进行底物特异性和反应机理等进行研究。3．选取气单胞(Aeromonassp．)和破壁后的HP0203菌(hDDAAO)作为反应菌株，提供D一氨基酸氧化酶(DAAO)，分别对其底物的特异性，反应机理等进行研究。关键词：生物催化，D．氨基酸氧化酶(DAAO)，L．氨基酸氧化酶(LAAO)ⅡAbstract0【-amin

6、oacidshaveplayedanimportantroleincurrentlifescienceresearchandbiomedicaldevelopment．0【-AminoAcids(c【-AAs)arethemajorcomponentsofprotein，andalsothemostimportantAminoAcidsintheorganism．TheAminoAcidswhichconstitutetheproteininhumanbodyarealla·AminoAcids．Inthe20AminoAcidsexistedinthenature，

7、exceptingforglycine，allof0【·AminoAcidsarechiral，andrespectively,playauniquefunctionlinkedwithpeople’Slifeclosely．However，thenumberofnaturalaminoacidsislimited，andthenon．naturalaminoacidsaremostlyracemic．D-enantiomersevenplayadifferentphysiologicalrolewithL．enantiomers．Inthisart