高糖对人脐静脉内皮细胞分泌pai-1、t-pa的影响及茶多酚的干预研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文高糖对脐静脉内皮细胞分泌PAI．1，tPA的影响及茶多酚的干预作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22附表⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32综述纤溶系统与糖尿病血管并发症的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48中文摘要高糖对人脐静脉内皮细胞分泌PAI．1，t-PA的影响及茶多酚的干预作用摘要目的：糖尿病大血

3、管病变(Diabeticmacroangiopathy)是糖尿病最常见的并发症之一，也是引起动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)的重要因素。1型纤溶酶原激活物抑制剂(Plasminogenactivatorinhibitor．1，PAl．1)作为丝氨酸蛋白酶抑制剂(Sefineproteaseinhibitor)超家族的一员，是组织纤溶酶原激活物(tissue．typeplasminogenactivator，t-PA)及尿激酶纤溶酶原激活物(urokinoseplasminogenactiva

4、tor，u．PA)的主要生理抑制剂。临床流行病学调查显示，动脉粥样硬化患者血浆中PAl．1含量明显升高，且高含量的PAl．1有助于斑块的进展，提示PAl．1与AS的发生、发展密切相关n3。茶多酚(teapolyphenols，TP)是从茶叶中提取的一类多羟基酚类的总称。TP预防心血管疾病的作用己被引起广泛重视，但其具体机制尚未完全明了，尤其是TP能否通过保护内皮细胞的纤溶功能来预防AS的研究较少，本实验通过高糖环境诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell，HUVE

5、C)纤溶功能损伤，观察给予不同浓度的TP后PAl．1、t．PA的蛋白及mRNA水平的变化，旨在探讨体外实验中TP对血管内皮细胞的保护作用和对纤溶功能的影响。通过实验数据为TP可改善糖尿病大血管病变提供理论依据。内容：取无菌脐带，经胰酶消化后，原代培养脐静脉内皮细胞，达80％以上融合时予以传代培养，采用3．5代细胞用于下一步实验。选取生长状态良好的对数期细胞入组。实验分为9组：正常对照组(glucose5．5mmol／L，DMEM培养液)，高糖组(glucose30mmol／L，DMEM培养液)，高渗组(甘露醇2

6、4．5mmol／L+glucose5．5mmol／L，DMEM培养液)，茶多酚对照组(茶多酚浓度分别为10mg／L、20mg／L、30mg／L加入glucose5．5mmol／L，DMEM培养液)，茶多酚干预组(茶多酚浓度分别为10mg／L、20meet,、30mg／L加入glucose30mmol／L，DMEM培养液)，除高渗对照组外，各药物组均在高糖处理前30分钟分别加入药物，每组4孔细胞，加入药物后继续培养48小时后，检测各组细胞上清中t-PA及PAl—l含量，中文摘要同时检测各组细胞中t-PA及PAI．

7、1mRNA和蛋白的表达。实验方法：原代及传代脐静脉内皮细胞培养；ELISA法测定细胞上清液中的t-PA和PAI．1含量；MTT法检测细胞生存活力；细胞总RNA和总蛋白提取；RT．PCR和westernblot技术。结果：1与正常对照组比，高糖组细胞活性降低，有统计学意义(PO．05)。2与正常对照组比，NTl组细胞活性降低，NT3组细胞活性增高，且均有统计学意义(PO．05)。3与单纯高糖组比，H

8、Tl组细胞活力下降(尸