大鼠口腔黏膜上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的体外研究

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2、研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：云腕翩辟鳓＼V’7I>o／a年弓月’均日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文大鼠口腔黏膜上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的体外研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分原代培养大鼠口腔黏膜上皮细胞的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10

3、一日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2l小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23第二部分体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Z3材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯．38小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42综述骨髓间充质干细胞在阴道组织工程构建中的应用前景⋯⋯⋯．．43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52中文摘要大鼠口腔黏膜上皮细胞诱导骨髓问充质干细胞向上皮细胞分化的体外研究摘要各种原因导致阴道缺失的患者需要进行阴道成形术，传统手术存在着牺牲正常组织、遗留瘢痕、免疫排斥等问题。组织工程技术为阴道重建提供理想的组织衬里，并且重建的阴道有理想的深度和宽度，弥补了传统手术形成的人工阴道在形态和功能上的不足。种子细胞是进行组织

6、工程化组织构建的最为关键的要素，只有获得足够数量并保持特定生物学活性的种子细胞，才能保证组织构建的成功。目前阴道组织工程的种子细胞大都采用自体组织的同源细胞，但是存在着来源有限、细胞易老化、不能大规模扩增以及细胞取材对机体造成新的创伤等不足，因此，骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)向上皮细胞的诱导分化是其在阴道组织工程中应用的关键步骤。本研究尝试应用大鼠口腔黏膜上皮细胞体外诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞诱导分化，为BMSCs作为种子细胞应用于阴道组织工程奠定基础。第一部分原代培养大鼠口

7、腔黏膜上皮细胞的研究目的：探讨大鼠口腔黏膜上皮细胞体外培养方法，以应用于诱导BMSCs向上皮细胞分化的研究。方法：取大鼠口腔黏膜组织，分别用PBS配制的0．6U／ml的Dispase．II和D．KSFM配制的0．6U／ml的DispaseII，D．KSFM配制的O．6U／ml的DispaseII和D．KSFM配制的1．2U／tnl的DispaseII，记录每组上皮分离结果的评分及可获活细胞数，倒置相差显微镜下观察首次换液时细胞贴壁情况；分别用胰酶消化10minX二次和20min×一次方法，用KBM．GOLD培养基和含6％FBS的KBM．GOL

8、D培养基培养，记录每组上皮可获活细胞数，倒置显微镜观察细胞形态，扫描电镜观察细胞超微结构，免疫组化及免疫荧光鉴定。结果：PBS配制组与D．KSFM配制组相比，两者分